【摘 要】
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目的:寻求一种核受体家族蛋白NR4A1 DNA结合域(NR4A1 DNA binding domain,NR4A1-DBD)表达纯化的方法。方法:构建融合蛋白PET28a-NR4A1-DBD表达载体,分别通过镍亲和层析、阳离
【机 构】
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中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室结构生物学实验室,南加州大学化学与生命科学系
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目的:寻求一种核受体家族蛋白NR4A1 DNA结合域(NR4A1 DNA binding domain,NR4A1-DBD)表达纯化的方法。方法:构建融合蛋白PET28a-NR4A1-DBD表达载体,分别通过镍亲和层析、阳离子交换层析及凝胶过滤的方法对目的蛋白进行纯化。结果:PET28a-NR4A1-DBD蛋白在低温诱导(24℃)时多以可溶性形式存在,通过此纯化,可达到每升培养基产生2~3 mg蛋白,纯度高达95%以上。结论:镍亲和层析是一种可靠、实用的蛋白表达纯化方法,后续使用阳离子交换层析及凝胶过滤可以进一步提高蛋白纯度。
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