Lv-shRNA-Hsa-microRNA-691慢病毒表达载体的构建与鉴定

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目的构建Lv—shRNA-hsa—microRNA-691慢病毒表达载体。方法PCR扩增pri—miR-691-2前体序列,克隆至plenti—GFP慢病毒表达载体;双酶切及测序鉴定正确后进行慢病毒包装与滴度检测。构建成功后感染人胰腺癌细胞Panc-1,48h后Real—timeQ—PCR检测miR-691的表达。结果酶切、测序鉴定证明插入序列正确,测定病毒滴度为1×10^9TU/mL,病毒感染48h后的Panc—1胰腺癌细胞在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光,Real—timeQ-PCR显示被
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