mTOR特异性siRNA重组表达载体的构建及鉴定

来源 :实验与检验医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：chenfurongyalan

【摘要】

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目的构建mTORsiRNA重组表达载体，为探讨RNA干扰技术抑制巨噬细胞mTOR基因的相关研究奠定基础．方法设计具有短发夹结构的DNA序列，经退火成互补双链，再克隆至载体pGPU6／GFP／Neo中构建

【作者】

：

张才成陈静陈唐勇章登珊郑晓丰李俊明

【机构】

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南昌大学第一附属医院检验科,江西护理职业技术学院

【出处】

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实验与检验医学

【发表日期】

：

2013年6期

【关键词】

：

MTOR RNA干扰重组表达载体 mTOR RNA interference Recombinant expression vector

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目的构建mTORsiRNA重组表达载体，为探讨RNA干扰技术抑制巨噬细胞mTOR基因的相关研究奠定基础．方法设计具有短发夹结构的DNA序列，经退火成互补双链，再克隆至载体pGPU6／GFP／Neo中构建重组表达载体，转化DH5c~菌株，提取质粒行酶切鉴定后，并进行序列测定。再转染人巨噬细胞RAW264．7，进行荧光摄像和阳性克隆筛选。Westernblot方法检测巨噬细胞mTOR蛋白表达。结果DNA测序结果及PCR鉴定证实成功构建小鼠mTORsiRNA重组表达载体。Westernblot结果显示转染该重组

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