【摘 要】
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研究表明,口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A含有FMDV主要抗原决定簇,并在3C蛋白酶的裂解下表达FMDV衣壳蛋白,可诱导机体产生高水平的体液免疫应答。为了研究FMDV衣壳蛋白对鼠体内体液免疫应答的影响,本研究构建了含有O型FMDV P1-2A-3C基因的重组腺病毒表达载体,鉴定后将正确的质粒通过细菌内同源重组的方式构建了重组腺病毒rAdV-P12A3C。结果显示成功获得rAdV-P12
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪病综合防控创新团队
【基金项目】
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国家重点研发计划(2016YFD0501505);
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研究表明,口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A含有FMDV主要抗原决定簇,并在3C蛋白酶的裂解下表达FMDV衣壳蛋白,可诱导机体产生高水平的体液免疫应答。为了研究FMDV衣壳蛋白对鼠体内体液免疫应答的影响,本研究构建了含有O型FMDV P1-2A-3C基因的重组腺病毒表达载体,鉴定后将正确的质粒通过细菌内同源重组的方式构建了重组腺病毒rAdV-P12A3C。结果显示成功获得rAdV-P12A3C。将rAdV-P12A3C连续传至第8代,分别利用IFA和Western blot检测第2、4、6、8代rAdV-P12A3C外源基因在293细胞中的表达。结果显示,获得了表达FMDV P1-2A-3C基因的rAdV-P12A3C,且外源基因在病毒传代过程中能够稳定表达。测定rAdV-P12A3C的病毒效价并绘制一步生长曲线。结果显示,该rAdV-P12A3C传至第8代时,毒价可达7.2×108 TCID50/mL,表明外源基因插入后对重组腺病毒的病毒滴度未造成明显影响。将rAdV-P12A3C免疫4组BALB/c鼠,对BALB/c鼠进行采血并制备血清,通过间接ELISA方法检测鼠体内的抗体。结果显示,rAdV-P12A3C接种BALB/c鼠后7周(二免后3周)IgG抗体达到峰值,之后抗体水平逐渐下降,到第24周抗体水平接近阴性,表明rAdV-P12A3C能够刺激BALB/c鼠体内产生IgG抗体。上述研究结果表明:rAdV-P12A3C能够表达FMDV衣壳蛋白,并能在鼠体内产生高水平的体液免疫应答,为新型口蹄疫候选疫苗研究奠定了一定的基础。
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