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将原核表达载体pET 30中的黑曲霉源植酸酶基因(phyA)亚克隆到真核表达载体pCDNA 3的kpnI-EcoRI位点.根据pCDNA 3的序列在增强子的上游(209位)和BGH polyA下游(2049位)设计1对引物HM 1,HM 2扩增出含phyA基因的表达盒.将此表达盒以平末端连接的方式克隆到减蛋综合征病毒(EDSV)基因组右末端的转移载体pUHBC的SalI位点,酶切分析鉴定表达盒的方向,得到反向插入重组质粒pEDS-phyA.用Lipofectamine 2000将8μg pEDS-phyA