【摘 要】
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目的研究细胞外基质中的一种主要蛋白:纤维连接蛋白(FN)介导的人膀胱癌细胞(T24)对化疗药物丝裂霉素(MMC)的耐药现象,并阐明其发生的信号转导机制。方法 T24细胞与FN黏附后予
【机 构】
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上海交通大学医学院附属新华医院泌尿外科,上海交通大学医学院附属瑞金医院泌尿外科
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目的研究细胞外基质中的一种主要蛋白:纤维连接蛋白(FN)介导的人膀胱癌细胞(T24)对化疗药物丝裂霉素(MMC)的耐药现象,并阐明其发生的信号转导机制。方法 T24细胞与FN黏附后予以MMC处理及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)特异性抑制剂LY294002处理,分别检测其细胞凋亡及细胞周期情况。分别采用比色法、免疫荧光、蛋白印迹法及流式细胞术等技术检测Caspase-8、Caspase-9、凋亡诱导因子(AIF)3种凋亡通路的激活情况。蛋白印迹法检测细胞周期G1/S期转换的关键分子糖原合成激酶3β(GSK-3β)、Cyclin D1的表达水平。同时利用蛋白印迹法检测PI3-K/Akt信号通路的激活情况。结果 FN与T24细胞黏附后显著抑制了MMC诱发的细胞凋亡,且这种作用是通过抑制Caspase-9及AIF两种凋亡通路而非Caspase-8凋亡通路实现的。同时,FN通过失活GSK-3β而稳定了Cyclin D1的表达水平,从而拮抗了MMC诱导的T24细胞G1/S期停滞。FN介导的对T24细胞的保护作用是PI3-K/Akt依赖的,可以被LY294002阻断。结论 FN介导PI3-K/Akt信号通路激活促进了T24细胞对MMC的耐药。
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