【摘 要】
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根据猪繁殖与咱呼吸综合征病毒JX株编码N蛋白的ORF7基因序列设计特异性引物。采用RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因片段（367 bp）,将其克隆于表达载体pET-32a上。
【机 构】
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青岛农业大学动物科技学院,北京出入境检验检疫局
【基金项目】
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质检公益性行业科研专项“动物疫病核酸标准物质制备关键技术研究”（201310253）
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根据猪繁殖与咱呼吸综合征病毒JX株编码N蛋白的ORF7基因序列设计特异性引物。采用RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因片段（367 bp）,将其克隆于表达载体pET-32a上。测序验证后将重组质粒pET-32a-JX-N转入宿主菌Rosetta,经0.7 mmol/L IPTG诱导,SDS-PAGE显示外源基因编码的重组N蛋白在宿主菌中表达效率较高。Western-Blot试验结果显示,重组N蛋白具有反应原性。将纯化的重组N蛋白包被酶标板,建立并优化了能够用于PRRSV抗体检测的间接EL
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