【摘 要】
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目的采用Taq Man MGB探针技术,建立白色念珠菌实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测方法,为临床白色念珠菌的检测提供快捷的方法.方法以真菌D1/D2区基因的一段高度保守序列为扩增靶序
【机 构】
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昆明医科大学附属延安医院口腔科,临沧市人民医院口腔科,昆明医科大学第三附属医院科研科
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目的采用Taq Man MGB探针技术,建立白色念珠菌实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测方法,为临床白色念珠菌的检测提供快捷的方法.方法以真菌D1/D2区基因的一段高度保守序列为扩增靶序列,合成白色念珠菌特异性引物和探针,提取白色念珠菌标准菌株的DNA,构建含有靶基因片段的重建质粒,扩增后DNA作为标准品,建立白色念珠菌RQ-PCR的标准曲线,并对其重复性、敏感性及特异性等方面进行方法学评价.结果对构建好的克隆质粒测序,插入片段与预期片段序列一致,相似性达100%.白色念珠菌标准曲线为Y=-3.824x+41.36,R2=0.990,该扩增曲线形态良好.结论成功建立了实时荧光定量PCR检测白色念珠菌的方法,其敏感性和特异性较好.
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