【摘 要】
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目的:利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统制备人蛋白聚糖Versican G1区(VG1)的重组蛋白.方法:将编码人VG1蛋白343个氨基酸的基因插入pFastBac1载体,转化大肠杆菌DH10Bac,提取重组
【机 构】
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解放军总医院,加利福尼亚大学Irvine分校
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目的:利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统制备人蛋白聚糖Versican G1区(VG1)的重组蛋白.方法:将编码人VG1蛋白343个氨基酸的基因插入pFastBac1载体,转化大肠杆菌DH10Bac,提取重组Bacmids转染Sf9昆虫细胞,获取含重组人VG1蛋白的杆状病毒进一步感染昆虫细胞进行蛋白表达.通过Ni-NTA层析柱对重组蛋白进行纯化.免疫印迹方法对昆虫细胞培养上清中的蛋白成分进行鉴定,采用透明质酸结合实验确定重组人VG1蛋白的生物活性.结果:人VG1基因在昆虫细胞中获得高水平表达,重组人VG1蛋白
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