【摘 要】
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目的:获得马兜铃酸Ⅰ(Aristolochic acid Ⅰ,AAI)致肾小管上皮细胞损伤的动态差异转录组,为进一步探讨AAI肾毒性分子机制奠定基础.方法:基于CCK8和检测LDH活性,采用136.51 μg/mL AAI孵育HK-2细胞0、3、6、12、24 h,提取细胞样本总RNA并进行高通量转录组测序,计算基因在不同样本中的表达量;筛选不同时间点与0 h间差异基因,筛选条件为差异倍数大于2且P值小于0.05;应用基因本体论(gene ontolog,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto en
【机 构】
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上海中医药大学附属曙光医院·肝病研究所,上海 201203;上海中医药大学附属曙光医院·肝病研究所,上海 201203;上海市中医临床重点实验室,上海 201203
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目的:获得马兜铃酸Ⅰ(Aristolochic acid Ⅰ,AAI)致肾小管上皮细胞损伤的动态差异转录组,为进一步探讨AAI肾毒性分子机制奠定基础.方法:基于CCK8和检测LDH活性,采用136.51 μg/mL AAI孵育HK-2细胞0、3、6、12、24 h,提取细胞样本总RNA并进行高通量转录组测序,计算基因在不同样本中的表达量;筛选不同时间点与0 h间差异基因,筛选条件为差异倍数大于2且P值小于0.05;应用基因本体论(gene ontolog,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)数据库进行基因的功能分析;通过韦恩图分析不同时间点的共有和特有差异基因,利用qRT-PCR验证随机挑选的差异基因的表达量,验证是否与转录组测序结果的变化趋势一致.结果:全部样本共获得115.48 G的干净序列.与对照组相比,3、6、12、24 h不同时间点差异基因数量分别为1 535、2 406、3 439、5 073个,其中上调基因分别为920、1 405、1 675、2 623个,下调基因分别为615、1 001、1 764、2 450个.差异基因中共有2 873个获得GO数据库功能注释,主要涉及生物过程、细胞组成与分子功能3个大类.KEGG分析发现上调差异基因富集的条目主要是神经活性配体-受体相互作用、苯丙氨酸代谢、癌症的转录失调等,下调差异基因富集的条目主要涉及细胞因子-细胞因子受体相互作用、TNF信号通路、Wnt信号通路等.结论:本研究得到大量时效转录组数据库和差异表达基因,对不同时间点共有差异基因进行了功能注释与PCR验证,表明马兜铃酸Ⅰ的肾小管上皮细胞毒性过程涉及神经活性配体-受体相互作用、苯丙氨酸代谢、TNF信号通路等环节.
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目的 探究手足十二针对缺血性脑卒中偏瘫患者大脑初级运动区(M1区)与小脑功能连接的影响.方法 22例缺血性脑卒中偏瘫患者分为轻中度组14例、重度组8例.所有患者给予手足十二针针刺干预:取双侧合谷、内关、曲池、足三里、阳陵泉、三阴交,均使用捻转平补平泻手法得气后留针30 min,每日针刺1次,连续10天.针刺前后进行Fugl-Meyer量表(FMA)评分[包括上肢运动功能评分(FMA-Upper)和下肢运动功能评分(FMA-Lower)]、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分;并进行功能磁共振成像,
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