【摘 要】
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本研究旨在建立一种简便、快捷、可直观检测小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus， PPRV）抗体的检测方法。将pET-32a-N重组质粒转化至大肠杆菌（Escherichia coli） Rosetta （DE3）感受态细胞中进行诱导表达，以纯化的PPRV N蛋白免疫8周龄BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，间接酶联免疫吸附试验（e
【基金项目】
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山东省羊产业技术体系岗位专家项目（SDAIT-10-07）；
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本研究旨在建立一种简便、快捷、可直观检测小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus， PPRV）抗体的检测方法。将pET-32a-N重组质粒转化至大肠杆菌（Escherichia coli） Rosetta （DE3）感受态细胞中进行诱导表达，以纯化的PPRV N蛋白免疫8周龄BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，间接酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assays， ELISA）筛选及亚克隆，获得了抗PPRV N蛋白的单克隆抗体。将PPRV N蛋白分别作为金标抗原及检测线（T线）包被抗原、单克隆抗体作为质控线（C线）包被抗体，组装成检测PPRV N蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条。结果显示：成功获得1株能稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞株，命名为1F1；间接ELISA检测1F1腹水效价为1:128 000；亚类鉴定结果为IgG1，轻链为kappa链。Western blotting结果显示，1F1能与PPRV N蛋白特异性结合；间接免疫荧光（indirect immunofluorescent assay， IFA）结果显示，制备的单克隆抗体能够识别PPRV；建立的试纸条能够特异性地检测PPRV抗体，以不同批次的试纸条重复检测，结果无差异。根据122份临床血清的检测结果，PPRV抗体试纸与ELISA试验的符合率为97.6%。本研究建立的试纸条检测方法具有良好的特异性、重复性和敏感性，可用于PPRV抗体的快速检测。
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