【摘 要】
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目的 蛋白质组学分析鉴定来源于细粒棘球蚴原头节分泌的细胞外囊泡(EVs)中人源蛋白质的组分.方法 收集细粒棘球蚴病患者肝脏中的完整包囊,无菌条件下分离原头节,用含30％去外泌
【机 构】
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宁夏医科大学基础医学院,银川750004;宁夏医科大学医学科学技术研究中心 银川750004;宁夏回族自治区医学科学研究所,银川750004;宁夏医科大学临床医学院,银川750004
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目的 蛋白质组学分析鉴定来源于细粒棘球蚴原头节分泌的细胞外囊泡(EVs)中人源蛋白质的组分.方法 收集细粒棘球蚴病患者肝脏中的完整包囊,无菌条件下分离原头节,用含30％去外泌体的胎牛血清完全培养基体外培养原头节,每3天换1次培养基并收集培养上清,用Evs分离试剂盒分离培养上清中的Evs.透射电镜观察Evs的形态;纳米粒子跟踪分析Evs的粒径;采用液相色谱-质谱法对Evs进行蛋白质组学测序,二级质谱数据使用Maxquant(v1.5.2.8)进行蛋白检索与注释.将人源蛋白通过在线工具David进行组织、疾病及通路的富集比对与注释.结果 体外培养原头节分泌的Evs为杯状双层膜性囊泡,直径小于200 nm.蛋白质组学测序共测出20 317条肽段,鉴定获得1461个蛋白,其中328个为人源蛋白.原头节分泌的Evs中高度富集的外泌体标志蛋白有细丝蛋白、14-3-3蛋白、热休克蛋白90、热休克蛋白70和丙酮酸激酶.Evs的人源蛋白中,组织富集程度居前3位的为血浆、Cajal-Retzius细胞、肝脏.疾病富集中涉及感染、免疫和癌症等相关疾病.Bio Carta通路富集结果显示,富集程度居前3位的.分别为替代补体通路、凝集素补体通路和补体通路;KEGG通路富集程度居前3位的为黏着斑黏附信号通路、细胞外基质受体相互作用通路和蛋白酶体相互作用通路.结论 体外培养原头节分泌的Evs中的人源蛋白与人体血浆和肝脏等组织相关,提示原头节通过分泌Evs与人体进行物质交换.
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