目的 制备4种柯萨奇B3病毒（CVB3）结构和非结构蛋白重组质粒DNA疫苗，并探讨其诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果。方法 用基因重组技术构建4种CVB3结构和非结构蛋白重组质粒，将各重组质粒体外转染真核细胞，用Westernblot检测表达产物；于BALB/c小鼠后腿胫骨前肌注射免疫，于0、4、8周共免疫3次，100μg/次。免疫后不同时间检测体液和细胞免疫应答指标。结果 4种重组质粒酶切出相应大小的片段，经测序证实为CVB3序列，Westernblot证实能够在体外真核细胞中表达。pcDNA3/VP2、pcDNA3/VP1、pcDNA3/2A和pcDNA3/3D均可诱导小鼠产生相应的特异性抗体、细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和淋巴细胞增殖反应、迟发型超敏反应（DTH），并对致死量的CVB3m、CVB5和CVB2攻击具有保护作用，表现为病毒攻击后第3天血中病毒滴度降低，第10天心肌病理变化比对照组明显减轻，且小鼠生存率显著提高。其中以pcDNA/VP1和pcDNA3/3D组保护作用最明显。结论 CVB3结构蛋白VP1和非结构蛋白3D质粒DNA有可能用作CVBDNA疫苗的候选基因，值得进一步深入研究。