论文部分内容阅读
摘要为获得具有抗菌作用的物质，本研究对鸡脾脏和肝脏的粗提物进行了制备，并通过抑菌试验检测了粗提物对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抑菌活性。结果表明，鸡脾脏和肝脏的粗提物中存在着抗菌活性物质，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有较好的抑菌活性。
关键词 鸡;脾脏;肝脏;粗提物;抗菌活性
中图分类号 S831
文献标识码 A
文章编号 1007-5739（2019）05-0201-01
现阶段，抗生素的滥用造成了许多新问题，如细菌耐药性兽药残留以及抗生素的环境污染等"这些问题严重制约了畜牧业发展，同时也危害着人类健康4。寻找新的抗菌药物成为必然选择。宿主体内存在着许多可抵抗病原微生物感染的分子物质。因此，寻找与开发动物体内具有抗菌活性的物质可为绿色畜牧业健康发展保驾护航。
鸡的脾脏和肝脏中有很多具有重要生理功能的物质刊，其中有许多物质在抵抗病原微生物感染方面具有重要作用，维护了机体健康。本研究从鸡的脾脏和肝脏中提取具有抗微生物活性的物质，以期为研发新的抗菌药物提供新思路。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1鸡的脾脏和肝脏来源。鸡的脾脏和肝脏采集自河南省新乡市洪广镇中心菜市场。严格按无菌操作方法采取当天早上屠宰的鸡的新鲜脾脏和肝脏，经过检验确认无传染病，置于灭菌烧杯中，在4～10C冷藏条件下运至河南科技学院动物科技学院预防兽医学实验室，保存在-20C冰箱中，备用。1.1.2细菌来源。大肠杆菌CVCC2059和金黄色葡萄球菌ATCC25923菌种，由河南科技学院预防兽医学实验室提供。1.1.3常规试剂与仪器。试剂：硫酸庆大霉素注射液，济南利民制药有限责任公司生产;高纯度琼脂糖，美国AMRE-SCO生产;胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB），杭州微生物试剂有限公司生产;其他试剂为实验室常规试剂。仪器：移液器（型号为KHBBIOHIT），芬兰百得公司生产;一次性灭菌培养皿（直径为90mm），海门门市三和兴亚医疗器械厂生产;高压灭菌锅，购自上海申安医疗器械厂;生物超净工作台，购自苏州净化设备有限公司;37C培养箱，购自上海精宏实验设备有限公司;数显恒温水浴锅，购自上海一恒科学仪器有限公司;纯水仪，购自四川卓越水处理设备有限公司;电子天平，购自深圳市博途电子科技有限公司。
1.2试验方法
1.2.1培养基制备。营养琼脂固体培养基参照文献[5]进行制备，营养肉汤液体培养基参照文献[6]进行制备。
1.2.2细菌培养。参照文献[6]进行细菌的分离与培养。通过染色方法来判断细菌纯度，参照文献[7]进行染色。
1.2.3鸡脾脏粗提物的制备。按照参考文献[8-9]制备鸡脾脏和肝脏粗提物，并测定蛋白浓度。
1.2.4抗菌活性分析。参照文献[10]进行粗提物的抗菌活性检测。以庆大霉素为阳性对照，以灭菌生理盐水为阴性对照。
2结果与分析
2.1鸡脾脏和肝脏粗提物的测定
用灭菌去离子水将冻干后的鸡脾脏和肝脏粗提物全部溶解后，通过紫外分光光度仪测定的质量浓度分别为4.28、5.74g/L。
2.2抗菌活性分析
粗提物对于金黄色葡萄球菌（革兰氏阳性菌的代表）和大肠杆菌（革兰氏阴性菌的代表）的抗菌活性结果如图1、表1所示。可以看出，阳性对照和阴性对照均正确，鸡脾脏和肝脏的粗提物对所测试的细菌具有抗菌活性作用。这表明从鸡脾脏和肝脏中提取的粗提物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有很好的抑菌作用。
3结论与讨论
畜牧业中抗生素滥用给人类健康带来了极大威胁，国家开始禁止在饲料中添加抗生素"。寻找新的抗菌物质代替抗生素成为一种必然。鸡的脾脏和肝脏是屠宰后的“下水”，常被丢弃。本研究通过试验证实了鸡的脾脏和肝脏粗提物中存在着抗菌物质。因此，制备鸡脾脏和肝脏的粗提物添加于饲料中代替抗生素，可以预防和治疗鸡的某些细菌性疾病，从而达到无抗养殖的目的。
本研究仅分析了分离自鸡脾脏和肝脏的粗提物的抗菌活性，发现粗提物具有抗金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抗菌活性：但是针对发挥了抗菌活性作用的物质还需进行更深人的研究2。通过其他方法获得鸡脾脏和肝脏中具有抗菌活性的物质，并进一步分析其药效学及药物代谢动力学，对新抗菌活性物质在临床，上替代抗生素应用具有重要意义。
4参考文献
[1]孙卫东，尚学东.鸡病临床诊断指南[M]北京：机械工业出版社，2016.
[2]刘诚，黎满香，卢帅，等抗菌肽研究进展[J].动物医学进展，2013，32（3）：94-99.
[3]郑世军动物分子免疫学[M].北京：中国农业出版社，2015.
[4]杨汉春动物免疫学[M].2版.北京：中国农业大学出版社，2003.
[5]姚火春.兽医微生物学实验指导[M].2版北京：中国农业出版社，2002.
[6]胡桂学.兽医微生物学实验指导[M].北京：中国农业大学出版社，2006.
[7]胡建和，王丽荣，杭柏林.动物微生物学[M].北京：中国农业科学技术出版社，2006.
[8]赵志雨，王青，杭柏林，等.大肠杆菌诱导对肉鸡白细胞粗提物抗菌活性的影响[J].河南农业科学，2013，42（4）：149-152.
[9]胡建和，杭柏林，徐彦召，等动物源抗菌肽[M].北京：科学出版社，2015.
[10]曹澍泽.兽医微生物学及免疫学技术[M].北京：北京农业大学出版社，1992.
[11]中国饲料行业信息网.农业部将全面禁止在饲料中添加抗生素[J].农业技术与装备，2012（7）：53.
[12]白子霞，王宏军，龙元桃.党参提取物抗菌活性研究[J].辽宁中医杂志，2015，42（7）：1-3.
[13] HOIBY N， BJARNSHOLT T， GIVSKOV M ， et al.Antibiotic resistance of
关键词 鸡;脾脏;肝脏;粗提物;抗菌活性
中图分类号 S831
文献标识码 A
文章编号 1007-5739（2019）05-0201-01
现阶段，抗生素的滥用造成了许多新问题，如细菌耐药性兽药残留以及抗生素的环境污染等"这些问题严重制约了畜牧业发展，同时也危害着人类健康4。寻找新的抗菌药物成为必然选择。宿主体内存在着许多可抵抗病原微生物感染的分子物质。因此，寻找与开发动物体内具有抗菌活性的物质可为绿色畜牧业健康发展保驾护航。
鸡的脾脏和肝脏中有很多具有重要生理功能的物质刊，其中有许多物质在抵抗病原微生物感染方面具有重要作用，维护了机体健康。本研究从鸡的脾脏和肝脏中提取具有抗微生物活性的物质，以期为研发新的抗菌药物提供新思路。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1鸡的脾脏和肝脏来源。鸡的脾脏和肝脏采集自河南省新乡市洪广镇中心菜市场。严格按无菌操作方法采取当天早上屠宰的鸡的新鲜脾脏和肝脏，经过检验确认无传染病，置于灭菌烧杯中，在4～10C冷藏条件下运至河南科技学院动物科技学院预防兽医学实验室，保存在-20C冰箱中，备用。1.1.2细菌来源。大肠杆菌CVCC2059和金黄色葡萄球菌ATCC25923菌种，由河南科技学院预防兽医学实验室提供。1.1.3常规试剂与仪器。试剂：硫酸庆大霉素注射液，济南利民制药有限责任公司生产;高纯度琼脂糖，美国AMRE-SCO生产;胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB），杭州微生物试剂有限公司生产;其他试剂为实验室常规试剂。仪器：移液器（型号为KHBBIOHIT），芬兰百得公司生产;一次性灭菌培养皿（直径为90mm），海门门市三和兴亚医疗器械厂生产;高压灭菌锅，购自上海申安医疗器械厂;生物超净工作台，购自苏州净化设备有限公司;37C培养箱，购自上海精宏实验设备有限公司;数显恒温水浴锅，购自上海一恒科学仪器有限公司;纯水仪，购自四川卓越水处理设备有限公司;电子天平，购自深圳市博途电子科技有限公司。
1.2试验方法
1.2.1培养基制备。营养琼脂固体培养基参照文献[5]进行制备，营养肉汤液体培养基参照文献[6]进行制备。
1.2.2细菌培养。参照文献[6]进行细菌的分离与培养。通过染色方法来判断细菌纯度，参照文献[7]进行染色。
1.2.3鸡脾脏粗提物的制备。按照参考文献[8-9]制备鸡脾脏和肝脏粗提物，并测定蛋白浓度。
1.2.4抗菌活性分析。参照文献[10]进行粗提物的抗菌活性检测。以庆大霉素为阳性对照，以灭菌生理盐水为阴性对照。
2结果与分析
2.1鸡脾脏和肝脏粗提物的测定
用灭菌去离子水将冻干后的鸡脾脏和肝脏粗提物全部溶解后，通过紫外分光光度仪测定的质量浓度分别为4.28、5.74g/L。
2.2抗菌活性分析
粗提物对于金黄色葡萄球菌（革兰氏阳性菌的代表）和大肠杆菌（革兰氏阴性菌的代表）的抗菌活性结果如图1、表1所示。可以看出，阳性对照和阴性对照均正确，鸡脾脏和肝脏的粗提物对所测试的细菌具有抗菌活性作用。这表明从鸡脾脏和肝脏中提取的粗提物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有很好的抑菌作用。
3结论与讨论
畜牧业中抗生素滥用给人类健康带来了极大威胁，国家开始禁止在饲料中添加抗生素"。寻找新的抗菌物质代替抗生素成为一种必然。鸡的脾脏和肝脏是屠宰后的“下水”，常被丢弃。本研究通过试验证实了鸡的脾脏和肝脏粗提物中存在着抗菌物质。因此，制备鸡脾脏和肝脏的粗提物添加于饲料中代替抗生素，可以预防和治疗鸡的某些细菌性疾病，从而达到无抗养殖的目的。
本研究仅分析了分离自鸡脾脏和肝脏的粗提物的抗菌活性，发现粗提物具有抗金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抗菌活性：但是针对发挥了抗菌活性作用的物质还需进行更深人的研究2。通过其他方法获得鸡脾脏和肝脏中具有抗菌活性的物质，并进一步分析其药效学及药物代谢动力学，对新抗菌活性物质在临床，上替代抗生素应用具有重要意义。
4参考文献
[1]孙卫东，尚学东.鸡病临床诊断指南[M]北京：机械工业出版社，2016.
[2]刘诚，黎满香，卢帅，等抗菌肽研究进展[J].动物医学进展，2013，32（3）：94-99.
[3]郑世军动物分子免疫学[M].北京：中国农业出版社，2015.
[4]杨汉春动物免疫学[M].2版.北京：中国农业大学出版社，2003.
[5]姚火春.兽医微生物学实验指导[M].2版北京：中国农业出版社，2002.
[6]胡桂学.兽医微生物学实验指导[M].北京：中国农业大学出版社，2006.
[7]胡建和，王丽荣，杭柏林.动物微生物学[M].北京：中国农业科学技术出版社，2006.
[8]赵志雨，王青，杭柏林，等.大肠杆菌诱导对肉鸡白细胞粗提物抗菌活性的影响[J].河南农业科学，2013，42（4）：149-152.
[9]胡建和，杭柏林，徐彦召，等动物源抗菌肽[M].北京：科学出版社，2015.
[10]曹澍泽.兽医微生物学及免疫学技术[M].北京：北京农业大学出版社，1992.
[11]中国饲料行业信息网.农业部将全面禁止在饲料中添加抗生素[J].农业技术与装备，2012（7）：53.
[12]白子霞，王宏军，龙元桃.党参提取物抗菌活性研究[J].辽宁中医杂志，2015，42（7）：1-3.
[13] HOIBY N， BJARNSHOLT T， GIVSKOV M ， et al.Antibiotic resistance of