目的:研究HOXA9基因的表观遗传学调控机制,筛选靶向调控HOXA9基因的microRNA。方法:利用Tar-getscan在线分析软件预测特异性靶向HOXA9基因3’端非编码区域(3’UTR)的microRNA,采用PCR方法从1例健康供者DNA中扩增HOXA9基因3’UTR序列,插入经XbaI和PstI双酶切的荧光素酶报告载体pGL3-M,采用脂质体SuperFect包裹荧光素酶重组质粒及microRNA表达质粒转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。构建miR-196a结合位点突变的HOXA9基因3’端非编码区域突变型荧光素酶报告载体,采用脂质体SuperFect包裹荧光素酶突变型重组质粒及miR-196a表达质粒转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。miR-196amimics以脂质体Hiperfect转染至MV4-11细胞,实时定量PCR及Westernblot检测HOXA9mRNA及蛋白的表达。结果:成功构建了含有1628bp的HOXA9基因3’UTR序列的荧光素酶报告重组质粒pGL3-HOXA9-3’UTR,并通过酶切及基因测序方法的鉴定;荧光素酶报告实验提示miR-196a组荧光素酶活性明显低于对照组。成功构建了miR-196a的2个结合位点突变的HOXA9基因3’UTR序列的突变型荧光素酶报告重组质粒pGL3-HOXA9-mut3’UTR,并通过基因测序方法的鉴定。miR-196a可以下调野生型质粒的荧光素酶活性,不影响突变型质粒的荧光素酶活性。MV4-11细胞中过表达miR-196a,可以明显下调HOXA9mRNA及蛋白表达。结论:miR-196a通过靶向结合HOXA9基因3’UTR的结合位点特异调控HOXA9基因。