【摘 要】
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目的表达H7N2亚型禽流感病毒(AIV)HA1基因,用于感染H7亚型禽流感病毒抗体的检测和HA1蛋白功能研究.方法采用RT-PCR方法对H7N2亚型AIV HA1基因进行扩增,将PCR产物克隆于pGEM-T
【机 构】
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新疆农业大学,乌鲁木齐,830000农业部兽医诊断中心,北京,100094;
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目的表达H7N2亚型禽流感病毒(AIV)HA1基因,用于感染H7亚型禽流感病毒抗体的检测和HA1蛋白功能研究.方法采用RT-PCR方法对H7N2亚型AIV HA1基因进行扩增,将PCR产物克隆于pGEM-T-Easy载体,将该基因插入pGEX-4T-2中构建HA1基因原核表达载体, 转化BL21大肠杆菌后,在IPTG诱导下表达HA1蛋白,Western blot鉴定表达HA1蛋白.电洗脱方法纯化表达HA1蛋白,建立间接ELISA方法,对感染AIV H7、H9、H5亚型AIV阳性血清进行检测.结果成功克隆H7N2亚型AIV的HA1基因,其核苷酸序列长度966bp,编码322个氨基酸残基.构建HA1基因原核表达载体在大肠杆菌内表达出约61×103的HA1融合蛋白.Western blot和ELISA方法鉴定表明:表达HA1蛋白与感染H7亚型 AIV鸡血清有反应,与H5、H9亚型AIV阳性血清没有反应.结论本研究在大肠杆菌中成功表达了H7N2亚型AIV HA1基因蛋白,具有与感染H7亚型AIV阳性血清反应原性,不与H5和H9亚型AIV 感染阳性血清发生反应.
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