研究丰富环境(EE)对关键期后的单眼形觉剥夺性弱视大鼠视皮层17区N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚基2A(NMDA-NR2A)和NMDA-NR2B蛋白水平的影响,探讨EE对弱视视皮层突触可塑性的影响。
方法选取出生后2周龄的Wistar大鼠80只,按照随机数字表法分为正常对照组和实验组。实验组在整个关键期内行右侧眼睑缝合,制作单眼形觉剥夺(MD)弱视模型。45日龄时按照随机数字表法将实验组大鼠分为弱视组、标准环境组(SE组)和EE组,其中SE组和EE组于46日龄时打开右侧眼睑。60、75和105日龄时各组取3只大鼠,全身麻醉后行多聚甲醛心脏灌注,剪刀于颈部端头,取左侧大脑视皮层17区。采用苏木精-伊红染色观察大脑视皮层17区的分层,并采用免疫组织化学法检测在关键期后不同时期每组大鼠NMDA-NR2A和NMDA-NR2B的蛋白在大脑视皮层中的分布及表达。应用Image-Pro plus 6.0分析软件对实验产生的阳性反应产物进行累计吸光度(A)值检测。
结果光学显微镜下视皮层17区均可见NMDA-NR2A和NMDA-NR2B染色阳性细胞,多呈圆形或椭圆形,主要位于细胞膜。60、75和105日龄各组大鼠视皮层17区NMDA-NR2A表达总体比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。各时间点弱视组阳性细胞较正常对照组少;EE组阳性细胞较正常对照组少,较弱视组多。EE组60、75和105日龄NMDA-NR2A表达较SE组增强,但并未达到正常对照组水平,差异有统计学意义(均P<0.05)。60、75和105日龄各组大鼠视皮层17区NMDA-NR2B表达总体比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。各时间点弱视组阳性细胞较正常对照组多;60日龄EE组阳性细胞较正常对照组多,75日龄和105日龄和正常对照组接近。EE组60日龄NMDA-NR2B在视皮层的表达较SE组减弱,但并未达到正常对照组水平,差异均有统计学意义(均P<0.05)。EE组75日龄和105日龄时NMDA-NA2B表达量较SE组减弱,与正常对照组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。
结论视觉系统的可塑性不但存在于视觉发育的关键期以前,且在关键期之后视觉系统的可塑性仍然存在。作为一种非侵入性的干预方法,EE能通过改变NMDA-NR2A和NMDA-NR2B在视皮层中的表达使成年弱视大鼠的可塑性得以改善和恢复。