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【摘 要】目的 探讨活化小胶质细胞在急性脑梗死中的作用及其机制，为诊疗提供靶点与途径。方法 配置小胶质细胞标记液并建立急性脑梗死模型小鼠，分别于12h、24h、72h输注，测定相关指标对比。结果 于手术后12h、24h、72h移植，小胶质细胞于小鼠体内分布差异显著，小胶质细胞随着时间推移向梗死病灶周围聚集；12h后移植小鼠使用前肢的次数较24h、72h后移植显著增加；12h后移植小鼠脑梗死面积小于24h、72h移植者，差异显著（P<0.05）。结论 活化小胶质细胞在急性脑梗死中发挥重要作用，通过抑制神经细胞坏死促进神经细胞存活，进而影响患者神经功能与梗死体积，对预防、诊疗急性脑梗死具有一定的价值。
【关键词】活化小胶质细胞；急性脑梗死；机制研究
脑梗死又名缺血性脑卒中，是局部脑卒中因血液循坏障碍，致缺血、缺氧而发生软化坏死的一种脑部病变，其中急性脑梗死具有发病率高、死亡率高、致残率高的特点[1]。脑梗死病因复杂，近年来随着危险因素的增多，人口进入老龄化，我国急性脑梗死发病率逐年增高，给患者及其家属带来巨大的伤害，深入研究急性脑梗死的发病机制、相关因素对于该病的预防、诊疗具有重要意义。本次研究运用活化小胶质细胞在急性脑梗死小鼠中的作用及其机制进行阐述。
1 资料及方法
1.1 一般资料 取清洁级成年雄性昆明小鼠，体重25-35g，标准饲料喂养，饲养室温度20-25℃恒温，安静环境，实验前5日取至观察室[2]。
1.2 方法 选用倒置相差荧光显微镜、低速离心机、手术显微镜、磁力加热搅拌器、全自动生化分析仪等仪器设备，选用细胞示踪检测试剂盒、TTC等试剂，配制完好的原代培养第三代小胶质细胞。
小胶质细胞标记：于15ml离心管离心1ml CFDA-SE细胞标记液悬浮1.0×107细胞，取2μl配置好的小胶质细胞标记储存液（1000×）与前者混合，摇匀配置为CFDA-SE存储液（2×），将存有细胞CFDA-SE标记液与储存液（2×）1ml混合，以37℃恒温孵育10min，向离心管内倾入15%胎牛血清DMEM培养基混匀后以1200r/min离心持续5min取上清液再行洗涤，加入8ml完全培养基，孵育5min再次离心取上清液，再次加入10ml完全培养基，置于37℃恒温5%CO2培养箱培养，标记完成[3]。取第3代小胶质细胞CFDA为标记组，余下MG为对照组用MTT法检测CFDA SE标记，确认标记对小鼠小胶质细胞影响不显著再行实验。建立局灶性小鼠脑梗死模型：选用0.16mm单丝尼龙线处理后制备完成，采用右侧大脑动脉栓塞，于小鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉，用牙次刺之验证麻醉完全，常规消毒后于手术显微镜下手术；剪开小鼠皮下组织，取颈动脉分离总动脉与迷走神经并结扎、夹闭，将标记栓线插入颈总动脉开口并推送至小鼠大脑动脉起始部，将切口与栓线一同结扎后置于养殖箱中，选取假手术组步骤与手术组同但未插入栓塞[4]。
随机抽取实验鼠采用MRI检测模型稳定性，稳定性满意后继续实验；再次麻醉小鼠后固定，使用超导高场磁共振扫描仪，对冠状动脉进行检测。将培养好的小胶质细胞进行制备后以手术组小鼠作为移植对象，剪去后者颈前毛发后经锁骨下静脉向心脏方向注射标记好的小胶质细胞悬液50μl，以庆大霉素缝合；于移植后12、24、72h脱颈处死小鼠取其脑进行冰冻切片处理，以包埋剂冰冻，以切片机切片，厚度5μm，于荧光显微镜下观察小胶质细胞情况。
2 结 果
于手术后12h、24h、72h移植标记液小鼠大脑内小胶质细胞分布差异显著，小胶质细胞随着时间推移向梗死病灶周围聚集；12h后移植标记液小鼠使用前肢的次数较24h、72h显著增加；12h后移植标记液小鼠脑梗死面积小于24h、72h移植者。
3 讨 论
小胶质细胞（microglia，MG）广泛分布于中枢神经系统中，数量极多，约占神经胶质细胞总数5%-20%，其形态、免疫表型和生物学功能与单核/巨噬细胞性相似，学术界普遍认为其为中枢神经系统内主要免疫效应细胞[4]。小胶质细胞在生理条件正常、异常情况下均可发挥重要作用，具有监视脑部环境改变与预防外在感染及有毒物质的作用。本次研究中，经标记培养制备的小胶质细胞与小鼠体内胶质细胞并无显著性差异，通过输注入急性脑梗死模型小鼠中，随着时间的推移渐渐向病灶区域转移，及早输注小鼠其病灶面积相对较小、前肢活动次数较多，差异显著（P<0.05），说明小胶质细胞应用于脑梗死中具有抑制病灶发展、保护神经的作用，具有一定的临床价值，相信随着相关人类实验取得更多有价值的结果，其临床价值必将愈加凸显。
参考文献
[1]王淑英，邬剑，李尧，等.EGB对大鼠局灶性脑缺血—再灌注中小胶质细胞的影响[J].黑龙家医药科学，2013，36（05）：46-47.
[2]刘学华.动物脑炎和脑软化的病理特点[J].养殖技术顾问，2013，13（09）：8-9.
[3]仁富亮，宋少伟，李恩东.神经细胞和小胶质细胞的相互作用于神经变性性疾病的关系[J].中国卫生产业，2013，35（25）：156-157.
[4]潘新发，万曙.小胶质细胞在脑出血后继发性脑损伤中的作用[J].中国神经精神疾病杂志，2013，39（17）：437-438.
【关键词】活化小胶质细胞；急性脑梗死；机制研究
脑梗死又名缺血性脑卒中，是局部脑卒中因血液循坏障碍，致缺血、缺氧而发生软化坏死的一种脑部病变，其中急性脑梗死具有发病率高、死亡率高、致残率高的特点[1]。脑梗死病因复杂，近年来随着危险因素的增多，人口进入老龄化，我国急性脑梗死发病率逐年增高，给患者及其家属带来巨大的伤害，深入研究急性脑梗死的发病机制、相关因素对于该病的预防、诊疗具有重要意义。本次研究运用活化小胶质细胞在急性脑梗死小鼠中的作用及其机制进行阐述。
1 资料及方法
1.1 一般资料 取清洁级成年雄性昆明小鼠，体重25-35g，标准饲料喂养，饲养室温度20-25℃恒温，安静环境，实验前5日取至观察室[2]。
1.2 方法 选用倒置相差荧光显微镜、低速离心机、手术显微镜、磁力加热搅拌器、全自动生化分析仪等仪器设备，选用细胞示踪检测试剂盒、TTC等试剂，配制完好的原代培养第三代小胶质细胞。
小胶质细胞标记：于15ml离心管离心1ml CFDA-SE细胞标记液悬浮1.0×107细胞，取2μl配置好的小胶质细胞标记储存液（1000×）与前者混合，摇匀配置为CFDA-SE存储液（2×），将存有细胞CFDA-SE标记液与储存液（2×）1ml混合，以37℃恒温孵育10min，向离心管内倾入15%胎牛血清DMEM培养基混匀后以1200r/min离心持续5min取上清液再行洗涤，加入8ml完全培养基，孵育5min再次离心取上清液，再次加入10ml完全培养基，置于37℃恒温5%CO2培养箱培养，标记完成[3]。取第3代小胶质细胞CFDA为标记组，余下MG为对照组用MTT法检测CFDA SE标记，确认标记对小鼠小胶质细胞影响不显著再行实验。建立局灶性小鼠脑梗死模型：选用0.16mm单丝尼龙线处理后制备完成，采用右侧大脑动脉栓塞，于小鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉，用牙次刺之验证麻醉完全，常规消毒后于手术显微镜下手术；剪开小鼠皮下组织，取颈动脉分离总动脉与迷走神经并结扎、夹闭，将标记栓线插入颈总动脉开口并推送至小鼠大脑动脉起始部，将切口与栓线一同结扎后置于养殖箱中，选取假手术组步骤与手术组同但未插入栓塞[4]。
随机抽取实验鼠采用MRI检测模型稳定性，稳定性满意后继续实验；再次麻醉小鼠后固定，使用超导高场磁共振扫描仪，对冠状动脉进行检测。将培养好的小胶质细胞进行制备后以手术组小鼠作为移植对象，剪去后者颈前毛发后经锁骨下静脉向心脏方向注射标记好的小胶质细胞悬液50μl，以庆大霉素缝合；于移植后12、24、72h脱颈处死小鼠取其脑进行冰冻切片处理，以包埋剂冰冻，以切片机切片，厚度5μm，于荧光显微镜下观察小胶质细胞情况。
2 结 果
于手术后12h、24h、72h移植标记液小鼠大脑内小胶质细胞分布差异显著，小胶质细胞随着时间推移向梗死病灶周围聚集；12h后移植标记液小鼠使用前肢的次数较24h、72h显著增加；12h后移植标记液小鼠脑梗死面积小于24h、72h移植者。
3 讨 论
小胶质细胞（microglia，MG）广泛分布于中枢神经系统中，数量极多，约占神经胶质细胞总数5%-20%，其形态、免疫表型和生物学功能与单核/巨噬细胞性相似，学术界普遍认为其为中枢神经系统内主要免疫效应细胞[4]。小胶质细胞在生理条件正常、异常情况下均可发挥重要作用，具有监视脑部环境改变与预防外在感染及有毒物质的作用。本次研究中，经标记培养制备的小胶质细胞与小鼠体内胶质细胞并无显著性差异，通过输注入急性脑梗死模型小鼠中，随着时间的推移渐渐向病灶区域转移，及早输注小鼠其病灶面积相对较小、前肢活动次数较多，差异显著（P<0.05），说明小胶质细胞应用于脑梗死中具有抑制病灶发展、保护神经的作用，具有一定的临床价值，相信随着相关人类实验取得更多有价值的结果，其临床价值必将愈加凸显。
参考文献
[1]王淑英，邬剑，李尧，等.EGB对大鼠局灶性脑缺血—再灌注中小胶质细胞的影响[J].黑龙家医药科学，2013，36（05）：46-47.
[2]刘学华.动物脑炎和脑软化的病理特点[J].养殖技术顾问，2013，13（09）：8-9.
[3]仁富亮，宋少伟，李恩东.神经细胞和小胶质细胞的相互作用于神经变性性疾病的关系[J].中国卫生产业，2013，35（25）：156-157.
[4]潘新发，万曙.小胶质细胞在脑出血后继发性脑损伤中的作用[J].中国神经精神疾病杂志，2013，39（17）：437-438.