【摘 要】
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目的 制备甲型H1N1流感病毒mRNA疫苗，并评价其免疫原性。方法 设计并构建分别含有甲型H1N1流感病毒血凝素（hemagglutinin,HA）和绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因的模板质粒，通过单酶切反应制备线性化转录模板，体外转录合成HA-mRNA和EGFP-mRNA。EGFP-mRNA体外转染HEK293T细胞，荧光显微镜下
【机 构】
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武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究二室
【基金项目】
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国家科技重大专项重大新药创制项目（2015ZX09102021,2016ZX09106003-008）；
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目的 制备甲型H1N1流感病毒mRNA疫苗，并评价其免疫原性。方法 设计并构建分别含有甲型H1N1流感病毒血凝素（hemagglutinin,HA）和绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因的模板质粒，通过单酶切反应制备线性化转录模板，体外转录合成HA-mRNA和EGFP-mRNA。EGFP-mRNA体外转染HEK293T细胞，荧光显微镜下观察荧光表达情况。利用纳米药物制备系统制备HA-mRNA脂质体纳米颗粒（lipid nanoparticles,LNPs），即HA-mRNA-LNPs，测量粒径并计算包封率。用含2和10μg HA-mRNA的HA-mRNA-LNPs经肌肉分别免疫BALB/c小鼠，同时设LNPs组（等体积未包裹mRNA的LNPs）和阴性对照组（等体积PBS）,3周后进行加强免疫，免疫剂量和途径同上。加强免疫后3周，经小鼠眼眶后静脉丛采血，分离血清，采用血凝抑制（haemagglutination inhibition,HI）试验和病毒微量中和（microneutralization assay,MN）试验分别检测血凝抑制抗体滴度及中和抗体水平，并计算几何平均滴度（geometric average titer,GMT）。结果 EGFP-mRNA转染HEK293T细胞后，镜下可见明显EGFP表达。HA-mRNA-LNPs的颗粒平均直径为70.2 nm，聚合物分散性指数为0.15，包封率约为80%。与阴性对照组比较，LNPs组小鼠血清的HI GMT和MN GMT差异均无统计学意义（P＞ 0.05）,2和10μg剂量组均显著升高（P均＜0.000 1）;10μg剂量组均显著高于2μg剂量组（P均＜0.01）。结论 制备的甲型H1N1流感病毒mRNA疫苗在BALB/c小鼠模型中具有较好的免疫原性，本研究为流感mRNA候选疫苗的研发提供了实验依据。
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