【摘 要】
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目的 旨在寻求一种能完全替代目前常规体外转录合成肿瘤相关抗原(TAA)mRNA的方法.方法 构建4个质粒包括pmRNA荧光素(Luc)、pmRNA IRES-Luc、pmRNA鸡卵清蛋白(OVA)和pmRNA IRE
【机 构】
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北京军区总医院血液科,加拿大麦克玛斯特大学病理分子医学系基因治疗中心
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目的 旨在寻求一种能完全替代目前常规体外转录合成肿瘤相关抗原(TAA)mRNA的方法.方法 构建4个质粒包括pmRNA荧光素(Luc)、pmRNA IRES-Luc、pmRNA鸡卵清蛋白(OVA)和pmRNA IRES-OVA,用Luc报告系统检测不同形式的Luc mRNA转染小鼠树突状细胞(DC)后的蛋白表达水平;以OVA作为靶抗原,以小鼠黑色素瘤肺转移作为动物模型,通过体内细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤实验及荷瘤实验,比较Capped-OVA mRNA和IRES-OVA mRNA修饰DC所诱发的抗原特异性细胞免疫反应.结果 将IRES序列插入mRNA转录模板编码基因cDNA序列前,不影响体外转录合成相应mRNA的产量.不同形式Luc mRNA转染DC后8 h,IRES-Luc mRNA较Capped-Luc mRNA表达的酶活性高1倍,而较Uncapped-Luc mRNA高20倍;IRES-Luc mRNA和Capped-Luc mRNA转染DC 96 h后仍能检测到Luc活性.用Capped-OVA mRNA和IRES-OVA mRNA修饰DC免疫小鼠1周后行体内CTL杀伤实验,结果示Capped-OVA mRNA/DC免疫组4 h CTL杀伤率为(28±3)%,而IRES-OVA mRNA/DC免疫组4 h CTL杀伤率为(32±4)%.荷瘤实验显示,Capped-OVA mRNA/DC和IRES-OVA mRNA/DC免疫小鼠后均能保护小鼠肺部免受黑色素瘤转移结节形成.结论 含IRES序列的TAA mRNA可作为一种更经济、适用的方法,完全可以取代Cap化mRNA修饰DC,并能诱导与Cap化mRNA修饰DC同样有效的抗原特异性细胞免疫反应.
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