体外HTLV—Ⅰ Tax蛋白在Müller细胞中的靶蛋白分析

来源 :中华实验眼科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:weizx20090123
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目的 观察体外人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV—Ⅰ)Tax蛋白与Müller细胞蛋白结合及其靶蛋白组成成分。方法用含Tax蛋白cDNA的原核表达载体PGEX-3X-GST-Tax转化大肠杆菌,诱导表达并提取纯化GST-Tax融合蛋白;细胞外GST-Tax融合蛋白与Müller细胞蛋白结合,GS4B下拉(pull-down)与GST-Tax结合的蛋白;应用二维凝胶电泳、质谱分析(MALDI-Tof-MS)和免疫印迹分析等方法分析鉴定结合的蛋白。结果通过与对照组比较,在二维凝胶电泳上观察到多个差异蛋白质斑点,经质谱分析鉴定出10个差异蛋白质为Tax的候选靶蛋白,经免疫印迹,初步证实Tax蛋白能与ENO1相结合。结论初步分离鉴定卅Müller细胞中的EN01等蛋白质可能为Tax蛋白的靶蛋白分子。

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