【摘 要】
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目的 探讨HLA-G α1结构域中特异的Met76和Gln79两个位点在HLA-G特异性受体KIR2DL4识别中的作用.方法 采用真核表达载体CD51neg1,克隆表达KIR2DL4胞外区与IgGFc段的可溶性融
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目的 探讨HLA-G α1结构域中特异的Met76和Gln79两个位点在HLA-G特异性受体KIR2DL4识别中的作用.方法 采用真核表达载体CD51neg1,克隆表达KIR2DL4胞外区与IgGFc段的可溶性融合蛋白;利用"桥式"PCR和"点突变"方法,将位于HLA-G目的基因α1结构域中编码Met76和Gln79的密码子突变为Ala76,79(HLA-mG),通过逆转录病毒表达载体分别使野生型HLA-G及其突变体在HLAⅠ分子阴性的K562细胞上表达.流式细胞术分别测定KIR2DL4-IgG Fc融合蛋白与野生型HLA-G及Met76、Gln79→Ala76,79 HLA-G突变体结合的荧光强度,通过比较两者的平均荧光强度分析HLA-G分子Met76、Gln79残基在HLA-G与其受体KIR2DL4识别过程中的作用.结果 Western blot结果显示,本实验成功表达KIR2DL4-IgG Fc融合蛋白.FACS结果表明,野生型HLA-G及Met76、Gln79→Ala76,79 HLA-G突变体在K562细胞上高表达.Met76、Gln79突变为Ala76,79后能显著影响KIR2DL4对HLA-G分子的识别.结论 HLA-Gα1结构域中Met76和Gln79可能是其特异性受体KIR2DL4识别的关键位点.
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