【摘 要】
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目的 克隆并在肺癌细胞SKMES1中表达色素上皮衍生因子(PEDF)蛋白;在体实验中观察PEDF蛋白过表达后对肺癌细胞生长和肿瘤相关性新生血管形成的影响.方法 通过PCR技术扩增出可
【机 构】
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北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,Research
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目的 克隆并在肺癌细胞SKMES1中表达色素上皮衍生因子(PEDF)蛋白;在体实验中观察PEDF蛋白过表达后对肺癌细胞生长和肿瘤相关性新生血管形成的影响.方法 通过PCR技术扩增出可以表达PEDF蛋白的全长基因;利用基因重组技术与pEF6/v5-His质粒连接后构建出PEDF基因过表达载体PEDFexp;将PEDFexp载体转染SKMES1肺癌细胞,建立稳定过表达PEDF蛋白的肺癌细胞株;将过表达PEDF蛋白的肺癌细胞接种于鸡胚,在体实验中明确PEDF蛋白过表达后对肺癌细胞生长和肿瘤新生血管形成的影响.结果 从人体组织的cDNA中成功扩增出PEDF全长序列,并正确构建了可以表达PEDF蛋白的载体,基因测序证实所构建的质粒载体中正确连接了没有核苷酸突变的目的 片段;RT-PCR和Western印迹实验在RNA和蛋白水平证实,稳定转染PEDFexp质粒的肺癌细胞与对照组肺癌细胞相比可以过表达PEDF蛋白.鸡胚实验证实PEDF基因过表达后,SKMES1PEDFexp肺癌细胞形成病灶的体积明显小于对照组[(0.10 ±0.05)cm3vs(0.17±0.07)cm3](P=0.016);SKMES1PEDFexp肺癌细胞形成病灶的质量也明显小于对照组细胞[(0.008±0.004)mg vs(0.024±0.009)mg](P=0.006).肿瘤相关新生血管计数结果 显示,PEDF基因的过表达后,肿瘤病灶中一级血管的数量明显少于对照组细胞(15±3 vs 41±9)(P
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