【摘 要】
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目的 探讨DNA甲基化转移酶抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人膀胱癌EJ细胞Runt相关转录因子3(RUNX3)基因组蛋白甲基化和基因表达的影响.方法 培养人膀胱癌EJ细胞,用不同浓度5-Aza-CdR干预细胞.采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法观察5-Aza-CdR对EJ细胞增殖活性的影响;通过染色质免疫沉淀技术分析干预前后RUNX3基因启动子区和第2个外显子区组蛋白H3第
【机 构】
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200072上海同济大学附属第十人民医院检验科,200072上海同济大学附属第十人民医院检验科
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目的 探讨DNA甲基化转移酶抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人膀胱癌EJ细胞Runt相关转录因子3(RUNX3)基因组蛋白甲基化和基因表达的影响.方法 培养人膀胱癌EJ细胞,用不同浓度5-Aza-CdR干预细胞.采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法观察5-Aza-CdR对EJ细胞增殖活性的影响;通过染色质免疫沉淀技术分析干预前后RUNX3基因启动子区和第2个外显子区组蛋白H3第9位赖氨酸(H3-K9)的甲基化状态;以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测干预前后RUNX3基因的表达.结果5-Aza-CdR对EJ细胞生长的抑制作用呈现剂量依赖性和时间依赖性,在浓度为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0 μmol/L时,细胞存活率分别为:98.1%,95.3%,75.9%,52.3%,16.2%和7.7%,在时间为12、24、36、48、72、96 h的细胞存活率分别为:89.4%,85.2%,78.6%,37.1%,8.9%,7.1%,其中浓度为1.0、2.0、5.0、10.0 μmol/L组与对照组(5-Aza-CdR 0 μmol)相比,差异有统计学意义(P<0.05).EJ细胞存在RUNX3基因组蛋白H3-K9的三甲基化和RUNX3基因表达的缺失;2.0 μmol/L 5-Aza-CdR干预细胞后RUNX3基因启动子区和第2个外显子区组蛋白H3-K9发生去甲基化,基因恢复表达.结论 5-Aza-CdR对人膀胱癌EJ细胞生长增殖有明显的抑制作用;并可能通过诱导RUNX3基因组蛋白H3-K9的去甲基化使基因重新表达,组蛋白H3-K9三甲基化可能是该基因失活的重要原因之一。
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