重组人PCNA突变体的克隆与稳定表达

来源 :现代生物医学进展 | 被引量 : 0次 | 上传用户：winyx000

【摘要】

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目的：构建重组人PCNA突变体（mutant PCNA，mPCNA）的真核表达质粒，并建立稳定高表达该目的蛋白的宫颈癌细胞系Hela，为进一步研究PCNA在DNA损伤修复中重要的生物学功能奠定基础。方法：

【作者】

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位全芳杨劲曾益军周虎传李劲刘洋李杰

【机构】

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第三军医大学基础部生化与分子生物学教研室,第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所

【出处】

：

现代生物医学进展

【发表日期】

：

2008年4期

【关键词】

：

增殖细胞核抗原突变体稳定转染 HELA细胞 PCNA Mutant Stable transfection Hela cell

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目的：构建重组人PCNA突变体（mutant PCNA，mPCNA）的真核表达质粒，并建立稳定高表达该目的蛋白的宫颈癌细胞系Hela，为进一步研究PCNA在DNA损伤修复中重要的生物学功能奠定基础。方法：将含有定点突变的PCNAcDNA序列克隆到T载体中，然后再亚克隆到真核表达载体pCDNA3．1／V5-HisA上，构建真核表达载体质粒pCDNA3．1／V5-HisA-mPCNA，稳定转染到Hela细胞中；Western Blotting法检测蛋白的表达情况；白细胞记数法测定细胞的生长速率。结果：真核表达

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