禽流感病毒H5亚型HA基因在杆状病毒系统中的表达及生物学活性鉴定

来源 :中国预防兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:scv100
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为研究禽流感病毒(AIV)HA蛋白抗原活性,本研究将A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)的HA基因片段克隆于pFastBacHTA中,构建重组质粒pFastBacHTA-HA,转化至DH10Bac感受态细胞,构建重组杆粒,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。采用间接免疫荧光、western blot和血凝试验对所表达的蛋白进行抗原性和生物学活性分析。结果表明,表达重组蛋白分子量约为64 ku;IFA和western blot试验证明重组HA蛋白能够与H5亚型禽流感阳性血清特异结合,具有良好的抗原性;血凝试验和淋巴细胞增殖试验显示重组蛋白具有良好生物学活性。重组蛋白的正确表达为进一步研究HA基因功能活性和制备禽流感HA基因亚单位疫苗奠定了基础。
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目的 分析柯萨奇病毒B3(CVB3)KM06/2009全基因序列,并对其分子变异、进化特点和毒力特征进行分析。方法设计针对CVB3引物,提取病毒RNA,RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列。利用Mega4.1、RDP3和SimPlot3.5.1等软件分析全基因序列。结果CVB3KM06/2009病毒株全基因组全长7401bp个核苷酸(nt),5’端和3’端分别为743nt和100nt的非编码区,