【摘 要】
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目的 建立设有内对照的TaqMan探针Real-time PCR方法 ,用于检测人血清中细小病毒B19.方法 人工合成2段DNA序列,克隆到T载体,线性化后进行DNA定量,分别作为模板标准品和内对照
【机 构】
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山东大学医学院,中国疾控中心病毒病预防控制所
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目的 建立设有内对照的TaqMan探针Real-time PCR方法 ,用于检测人血清中细小病毒B19.方法 人工合成2段DNA序列,克隆到T载体,线性化后进行DNA定量,分别作为模板标准品和内对照;合成1对引物和不同荧光素标记的2条探针,2条探针分别能与阳性模板或内对照结合,建立设有内对照的B19 Real-time PCR检测方法 .对方法 的稳定性进行了评价,并应用于人血清B19病毒检测.结果 获得了B19检测标准DNA和内对照DNA,确定了内对照的添加量,建立了使用内对照的Real-time PCR检测方法 .对160份血清标本进行了检测,检出2份阳性标本,病毒DNA浓度分别为2.1 × 105Geq/ml和3.6×103Geq/ml.结论 成功建立了人细小病毒B19 Real-time PCR检测方法 ,可用于人血清B19检测;由于使用了内对照,该方法 有利于排除假阴性检测结果 .
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