【摘 要】
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早期快速诊断是防控呼吸道病毒传播的有效手段，研发灵敏、特异、快速的分子检测技术方法是早期防控的前提和保障。本研究建立同时快速检测甲型流感病毒（Influenza A virus,FluA）、副流感病毒1型（Human parainfluenza virus 1,HPIV-1）、呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus,RSV）通用型、人偏肺病毒（Human metap
【基金项目】
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南京海关（原江苏出入境检验检疫局）立项课题（项目号：2017KJ44），题目：国际班轮空气致病病原体富集及检测的研究;南京海关（原江苏出入境检验检疫局）立项课题（项目号：2019KJ05），题目：新发及输入性传染病口岸快检关键技术研究；
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早期快速诊断是防控呼吸道病毒传播的有效手段，研发灵敏、特异、快速的分子检测技术方法是早期防控的前提和保障。本研究建立同时快速检测甲型流感病毒（Influenza A virus,FluA）、副流感病毒1型（Human parainfluenza virus 1,HPIV-1）、呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus,RSV）通用型、人偏肺病毒（Human metapneumovirus,HMPV）、人博卡病毒（Human bocavirus,HBoV）通用型和腺病毒B型（Adenovirus type B,AdVB）6种呼吸道病毒重组酶聚合酶扩增（Recombinase polymerase amplification,RPA）检测体系新的技术方法。选择人β-actin基因外显子区域序列作为内标基因，根据6种病毒特异性基因的保守区设计引物探针，结合商业化的逆转录重组酶聚合酶扩增（Revers transcript recombinases polymerase amplification,RT-RPA）反应试剂，优化体系的引物及探针浓度、温度、反应时间，构建6种病毒的RT-RPA检测体系。优化后病毒和内标基因的RT-RPA检测引物和探针终浓度分别为400nmol/L和200nmol/L，最佳反应温度为39℃，最优反应时间为15min。敏感性实验结果表明，本研究建立的RT-RPA反应体系对6种病毒的敏感性为1.0×10~4拷贝/mL，其中，对AdV-B的敏感性高达1.0×10~3拷贝/mL；特异性试验结果表明，不同病毒间特异性好，无交叉反应；重复性试验结果表明，6种病毒对高浓度（1.0×10~7拷贝/mL）和低浓度（1.0×10~4拷贝/mL）标准品检测出峰时间T变异系数小于5%，重复性好；对100例临床标本进行回顾性实验测试，与市售实时荧光PCR检测试剂盒的阳性符合率、阴性符合率和总体符合率均为100%。本研究提示，建立的RT-RPA检测体系可用于国境口岸对上述6种呼吸道病毒的日常监测与快速检测。
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