目的:以工业亚麻籽饼粕为原料,提取蛋白并制备抗氧化活性肽。方法:利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶酶解蛋白,并通过测定总抗氧化能力（FRAP法）、羟自由基清除能力和ABTS⁺自由基清除能力来表征酶解产物的活性。使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）和凝胶色谱法来分析蛋白和酶解产物的分子量（MW）分布。利用液质联用技术（LC-MS/MS）分析鉴定最具有抗氧化活性组分。结果:对于高分子量（3-10kDa）和低分子量（<3kDa）的蛋白多肽,<3kDa多肽（碱性蛋白酶）的抗氧化活性优于其它。10mg/mL<3kDa多肽（碱性蛋白酶）的Fe³⁺还原能力相当于1.77±0.03mmol/L的FeSO₄,羟自由基清除率为57.13%±1.47%,清除ABTS⁺自由基的能力相当于1.19±0.03mmol/LTrolox当量浓度。通过凝胶色谱分离的最具抗氧化活性组分F2的蛋白质量占整体组分的20%,0.1mg/mL组分F2的抗氧化活性相当于0.29mmol/L的FeSO₄,占整体组分活性的45.3%。结论:亚麻籽饼粕蛋白氨基酸组成齐全,含人体所需的八种必需氨基酸,是一种优质的植物蛋白;蛋白酶解的特异性和肽段分子量大小共同影响亚麻籽蛋白多肽的抗氧化活性;工业亚麻籽饼粕可以制备高抗氧化活性多肽。