【摘 要】
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组织缺氧是慢性下肢缺血性疾病发生发展的重要原因,其分子机制尚不清楚[1].本研究旨在观察ECV304细胞缺氧环境下缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的变化并探讨其意义.一、材料和方法1.细胞培养及活力分析:ECV304细胞缺氧处理采用混合气体(94％N2、5％CO2 、1％ O2)于RPMI 1640培养基中培养,噻唑蓝(MTT)比色法测定
【机 构】
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组织缺氧是慢性下肢缺血性疾病发生发展的重要原因,其分子机制尚不清楚[1].本研究旨在观察ECV304细胞缺氧环境下缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的变化并探讨其意义.一、材料和方法1.细胞培养及活力分析:ECV304细胞缺氧处理采用混合气体(94％N2、5％CO2 、1％ O2)于RPMI 1640培养基中培养,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活力.2.细胞周期分析:收集细胞,加入70％乙醇混悬,碘化丙锭(PI)染色30 min,上流式细胞仪检测.3.蛋白表达检测:采用Western blot方法检测HIF1-α、PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平.4.统计学方法:数据以均数±标准差((x)±s)表示,应用SPSS 11.5统计软件分析,采用ANOVA分析。
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