【摘 要】
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目的 建立简便有效的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)总RNA提取方法.方法 采用5种方法,分别为160、240和400 W超声波联合Trizol法(简称“160W超声法”、“240W
【机 构】
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四川大学华西公共卫生学院医学检验教研室,四川省疾病预防控制中心结核病预防控制所
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目的 建立简便有效的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)总RNA提取方法.方法 采用5种方法,分别为160、240和400 W超声波联合Trizol法(简称“160W超声法”、“240W超声法”和“400 W超声法”)、玻璃珠(简称“玻珠”)联合Trizol法(简称“玻珠法”)和Trizol法(简称“不加玻珠法”),对结核分枝杆菌标准株H37Rv进行破壁,提取总RNA.通过荧光定量逆转录PCR评价不同破壁方法对Mtb总RNA提取效果的影响,以灭菌超纯水代替模板为阴性对照.每种方法分别提取3份样本进行检测.最后结果为3份标本的平均值.结果 玻珠法检测组Ct值为20.67,△Rn值为0.644;400W超声法检测组Ct值为22.09,△Rn值为0.571;240W超声法检测组Ct值为21.86,△Rn值为0.503;160W超声法检测组Ct值为25.21,△Rn值为0.411;不加玻珠法检测组Ct值为28.40,△Rn值为0.299;阴性对照Ct值为40.00,△Rn值为0.000.结论 直观地从试验结果来看,玻珠法对结核分枝杆菌破壁效果好于超声法.
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