【摘 要】
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目的构建pc DNA3.1(+)-NPM1真核表达质粒,体外转染人膀胱移行细胞癌pumc-91细胞并观察其表达情况。方法设计引物,采用PCR扩增核仁磷蛋白1(Nucleophosmin,npm1)基因编码序列;
【机 构】
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首都医科大学附属北京世纪坛医院检验科北京大学第九临床医学院检验科尿液细胞分子诊断北京市重点实验室
【基金项目】
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北京市医管局首届登峰人才计划（编号：DFL20150701）
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目的构建pc DNA3.1(+)-NPM1真核表达质粒,体外转染人膀胱移行细胞癌pumc-91细胞并观察其表达情况。方法设计引物,采用PCR扩增核仁磷蛋白1(Nucleophosmin,npm1)基因编码序列;运用基因重组方法对其进行双酶切,插入pc DNA3.1(+)载体,经菌液PCR、测序对重组质粒进行鉴定。将成功构建的质粒经脂质体介导转染至pumc-91细胞,Western blot验证蛋白表达情况。结果经菌液PCR、测序鉴定表明成功构建pc DNA3.1(+)-NPM1质粒,将成功构建的质粒转染至pumc-91细胞,Western blot证实转染pc DNA3.1(+)-NPM1表达质粒的pumc-91细胞npm1蛋白过表达。结论成功构建pc DNA3.1(+)-NPM1重组质粒,为进一步研究NPM1蛋白的功能奠定基础。
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