【摘 要】
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目的建立ploy(A)聚合酶加尾的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法检测血清miR-29a,并作临床初步应用。方法用Trizol试剂提取血清总RNA。miR-29a ploy(A)聚合酶加尾逆转录获得c
【机 构】
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南通大学附属东台医院检验科,南通大学医学院免疫教研室
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目的建立ploy(A)聚合酶加尾的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法检测血清miR-29a,并作临床初步应用。方法用Trizol试剂提取血清总RNA。miR-29a ploy(A)聚合酶加尾逆转录获得c DNA,进行SYBR Green I实时定量PCR扩增检测。制作C.elegans-miR-39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线,绝对定量血清中miR-29a的表达水平。结果该方法能定量检测血清miR-29a表达水平,熔解曲线呈单峰,PCR扩增产物特异,在10~3copies/μl至10~6copies/μl范围内有良好的线性关系(r~2=0.991),并且检测重复性好。糖尿病患者血清中miR-29a表达水平明显高于健康体检者(P<0.05)。结论所建立的ploy(A)聚合酶加尾SYBR Green I实时荧光定量PCR方法能敏感、特异地检测血清中miR-29a的表达水平,为下一步临床应用的研究奠定了方法学基础。
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