【摘 要】
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首次将源于白囊耙齿菌(Irpexlacteus,I.lacteus)的一种锰过氧化物酶基因mnp(GenBank:MH120207.1)经密码子优化后与无任何抗性基因且有Gfa基因的高效表达载体pREP相连,构建原核-真核穿梭表达载体pREP-mnp,再电转化导入Gfa营养缺陷型粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中,构建生物安全级粟酒裂殖酵母,SDS-PAGE验证目的蛋白表达.所构建的工程菌胞外表达MnP,酶活力在第4天达到峰值,为17.46 U/L.所构建的工程菌经混菌发
【机 构】
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江苏大学 生命科学学院,镇江 212013;江苏中兴药业有限公司,镇江 212000
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首次将源于白囊耙齿菌(Irpexlacteus,I.lacteus)的一种锰过氧化物酶基因mnp(GenBank:MH120207.1)经密码子优化后与无任何抗性基因且有Gfa基因的高效表达载体pREP相连,构建原核-真核穿梭表达载体pREP-mnp,再电转化导入Gfa营养缺陷型粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中,构建生物安全级粟酒裂殖酵母,SDS-PAGE验证目的蛋白表达.所构建的工程菌胞外表达MnP,酶活力在第4天达到峰值,为17.46 U/L.所构建的工程菌经混菌发酵菌种筛选和氮源优化,在菌酶协同发酵中有显著的促进玉米秸秆木质素降解的效果.玉米秸秆中添加0.5％ 尿素、2％(NH4)2 SO4、0.02％Tween-80、使基质终浓度为0.5 mmol/L的草酸、0.5％CaCl2、0.3％MnSO4,S.pombe-pREP-mnp与N.crassa、S.pombe-man、C.utili、1％Lac、0.4％GOD协同发酵3 d后,玉米秸秆中木质素、半纤维素和纤维素的降解率分别为60.79％、27.61％和25.49％,真蛋白含量提高了310.99％.
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