【摘 要】
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为了制备高效的草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型VP6蛋白多克隆抗体并对其特异性进行鉴定,实验以草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型HZ08株为模板,采用PCR方法扩增S9基因,将该S9基因与pET-32a(+)载体连接
【机 构】
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西北农林科技大学动物医学院,农业部渔药创制重点实验室
【基金项目】
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广东省渔港建设和渔业发展专项(B201601-08);广州市荔湾区科技计划项目(20150114);大宗淡水鱼产业技术体系(CARS-46-09);农业部渔用药物创制重点实验室开放课题(201603)
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为了制备高效的草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型VP6蛋白多克隆抗体并对其特异性进行鉴定,实验以草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型HZ08株为模板,采用PCR方法扩增S9基因,将该S9基因与pET-32a(+)载体连接构建pET-32a-S9原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)后用IPTG诱导表达;纯化后的重组VP6蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,使用间接ELISA方法测定抗体效价,Western blot和IFA试验鉴定抗VP6蛋白多克隆抗体特异性。结果显示草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型的S9基因在原核表达载体中能够正确地表达VP6蛋
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