【摘 要】
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目的:探讨脯氨酸4-羟化酶β亚基（P4HB）蛋白在千层纸素A抗肝癌血管生成中的作用及其可能的机制。方法:Western blot检测6株人肝癌细胞系HCCLM3、Huh7、HepG2、MHCC97-L、Bel-7402及SMMC-7721中P4HB的蛋白表达。MTS试剂盒检测受试化合物对SMMC-7721细胞体外增殖的影响；LDH检测受试化合物对SMMC-7721细胞毒性影响；Western bl
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（编号：81703884）； 2020年度南通市市级科技计划（指导性）项目（编号：JCZ20164）； 2020年度南通市药学会-常州四药医院药学基金科研项目（编号：ntyx2010）；
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目的:探讨脯氨酸4-羟化酶β亚基（P4HB）蛋白在千层纸素A抗肝癌血管生成中的作用及其可能的机制。方法:Western blot检测6株人肝癌细胞系HCCLM3、Huh7、HepG2、MHCC97-L、Bel-7402及SMMC-7721中P4HB的蛋白表达。MTS试剂盒检测受试化合物对SMMC-7721细胞体外增殖的影响；LDH检测受试化合物对SMMC-7721细胞毒性影响；Western blot法检测受试化合物对SMMC-7721细胞中P4HB蛋白表达的影响；构建P4HB干扰质粒并转染SMMC-7721细胞，Western blot检测干扰转染效率；采用小管形成实验研究干扰P4HB对SMMC-7721细胞血管生成的影响；采用Western blot检测干扰P4HB对SMMC-7721细胞中hedgehog （Hh）信号相关蛋白Patched、Smo及Hhip蛋白表达影响；采用ELISA试剂盒检测激动Hh信号对P4HB蛋白调控SMMC-7721细胞血管内皮生长因子（VEGF）及血小板衍生生长因子（PDGF）分泌影响。结果:6株细胞中，SMMC-7721细胞表达P4HB蛋白最高。与对照组相比，千层纸素A体外可显著抑制抑制SMMC-7721细胞的增殖（P＜0.05）,并在100μmol·L-1以上时对细胞显示毒性作用（P＜0.05）。与对照组相比，千层纸素A可显著抑制SMMC-7721细胞中P4HB蛋白表达（P＜0.05）;与对照干扰组相比，P4HB干扰质粒可显著抑制SMMC-7721细胞中P4HB蛋白表达（P＜0.05）,表明质粒构建成功；与对照干扰组相比，干扰P4HB可抑制SMMC-7721细胞的血管生成（P＜0.05）,降低SMMC-7721细胞Patched及Smo的蛋白表达（P＜0.05）,并升高Hhip蛋白表达（P＜0.05）。此外，与对照组相比，千层纸素A亦能够抑制SMMC-7721细胞Patched及Smo的蛋白表达（P＜0.05）,并增加Hhip蛋白表达（P＜0.05）。与P4HB干扰组相比，激动Hh信号可减弱P4HB干扰所致的细胞VEGF及PDGF分泌下降的作用（P＜0.05）。结论:千层纸素A能够通过抑制P4HB介导的hedgehog信号抑制肝癌细胞的血管生成。千层纸素A是抗肝癌血管生成疗法的潜在化合物。
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