拟南芥DBB 1 a(double B-box 1a)蛋白的表达、纯化及Western blotting检测

来源 :激光生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：waxizhaojing

【摘要】

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PCR扩增拟南芥(Arabidopsis thaliana)DBB1a cDNA的保守区段(GenBank登录号:AT2G21320),转化到冷诱导表达载体pCold TF上,构建pCold-DBB1a重组质粒,转化大肠杆菌DH5a.15℃下I

【作者】

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屠小菊汪启明李秀山邓克勤唐东英罗泽宇赵小英刘选明

【机构】

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湖南大学生命科学与技术研究院,湖南,长沙,410082湖南大学生命科学与技术研究院,湖南,长沙,410082;湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室,湖南,长沙,410082;

【出处】

：

激光生物学报

【发表日期】

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2010年2期

【关键词】

：

DBB1a 原核表达蛋白纯化 Western blotting

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PCR扩增拟南芥(Arabidopsis thaliana)DBB1a cDNA的保守区段(GenBank登录号:AT2G21320),转化到冷诱导表达载体pCold TF上,构建pCold-DBB1a重组质粒,转化大肠杆菌DH5a.15℃下IPTG诱导表达融合蛋白,并通过SDS-PAGE检测.证实目的蛋白以可溶形式在约20 kD处高效表达,与预期蛋白大小相吻合.表达蛋白经Ni琼脂糖凝胶亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western blotting检测证实纯化后获得高纯度融合蛋白,这为进一步研究DBB1a功能奠定了基础.

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