【摘 要】
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目的构建实时荧光定量PCR(RFQ,-PCR的标准品以定量检测人B细胞激活因子受体.BAFF-R基因mRNA的表达.方法在BAFF-R基因高保守区设计了特异性的引物和荧光探针,用RT-PCR法从人外
【机 构】
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江苏省南通市第四人民医院检验科,南通大学附属医院酶学研究室,南通大学附属医院检验医学中心
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目的构建实时荧光定量PCR(RFQ,-PCR的标准品以定量检测人B细胞激活因子受体.BAFF-R基因mRNA的表达.方法在BAFF-R基因高保守区设计了特异性的引物和荧光探针,用RT-PCR法从人外周血单个核细胞的总mR-NA中逆转录扩增BAJFF-R的cDNA,将纯化的BAFF-R cDNA与PGEM-T载体进行连接,转化宿主菌DH-5α,然后提取重组质粒DNA,用限制性核酸内切酶EcoR Ⅰ进行酶切鉴定并测序分析,最后对质粒标推进行实时荧光定量PCR检测.纯化质粒并检测260nm吸光度,确定原被的重组
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