【摘 要】
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目的探讨p53的转录过程与其泛素调节的蛋白降解途径的相互关系.方法采用瞬时转染报告基因测定法,测定细胞裂解液荧光素酶活性(p53的转录活性)或Western-blot、免疫共沉淀测定
【机 构】
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大连医科大学药理教研室,美国俄亥俄州立大学细胞生物化学系,大连医科大学组织胚胎学教研室,大连医科大学生物化学教研室
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目的探讨p53的转录过程与其泛素调节的蛋白降解途径的相互关系.方法采用瞬时转染报告基因测定法,测定细胞裂解液荧光素酶活性(p53的转录活性)或Western-blot、免疫共沉淀测定细胞内p53蛋白水平.结果删除p53 N 末端1-19 个氨基酸(mdm2 结合位点), 可显著减少p53的转录活性, 提示p53的降解片段不能与其转录活性片段相分离. 特异性蛋白酶体抑制剂存在时, 细胞内p53稳态蛋白水平升高, 而p53的转录活性受到显著的抑制.UBA酶(ubiquitin-activating enzyme)失活,导致p53转录功能降低. 结论 p53的蛋白水解途径对其转录反应是必须的.
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