【摘 要】
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目的 探索创伤弧菌(Vv)感染树突状细胞(DC),经Toll样受体(TLR)2、4途径致DC急性坏死的实验研究.方法 建立Vv1.1758株与DC 2.4混合培养感染模型,用光学显微镜观察细胞感染率,电子显微镜观察Vv定位与细胞结构变化,实时定量反转录PCR测定TLR2、4mRNA表达量,ELISA法检测TNF-α表达量,DNA梯度电泳定性检测细胞凋亡,流式细胞术定量检测细胞凋亡及坏死率.率的比较
【机 构】
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314000浙江省嘉兴市第二医院中心实验室,314000浙江省嘉兴市第二医院中心实验室,嘉兴学院医学院微生物教研室,314000浙江省嘉兴市第二医院中心实验室,314000浙江省嘉兴市第二医院中心实验
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目的 探索创伤弧菌(Vv)感染树突状细胞(DC),经Toll样受体(TLR)2、4途径致DC急性坏死的实验研究.方法 建立Vv1.1758株与DC 2.4混合培养感染模型,用光学显微镜观察细胞感染率,电子显微镜观察Vv定位与细胞结构变化,实时定量反转录PCR测定TLR2、4mRNA表达量,ELISA法检测TNF-α表达量,DNA梯度电泳定性检测细胞凋亡,流式细胞术定量检测细胞凋亡及坏死率.率的比较采用x2检验,多组间数据比较采用方差分析.结果 混合培养0.5、1、2、4、6h时的细胞感染率分别为(7.8±0.8)％、(13.9±1.1)％、(34.6±4.9)％、(77.8±10.2)％和(95.8±13.1)％,混合培养2h后的感染率与培养0.5h相比差异有统计学意义(均P＜0.05).细菌定位于DC2.4细胞内侧,2h核染色质明显活跃,核内出现凋亡小体；4h胞质内出现空泡,染色质聚集,胞膜毁损严重；6h线粒体高度肿胀变形,细胞坏死.TLR2、4 mRNA表达于0.5h已达峰值.TNF-α在1h时开始增高(P＜0.05),2h达峰值.DNA梯度电泳2h呈冲刷状坏死,4～5 h出现720 bp与900 bp凋亡带.2、4、6h时细胞早期凋亡率分别为(3.1±3.8)％、(7.8±4.7)％和(12.7±8.2)％,显著高于对照组的(0.5±0.7)％(均P＜0.05).细胞坏死率分别为(16.7±12.5) ％、(41.6±25.9)％和(75.5±33.6)％,显著高于对照组的(2.3±0.8)％(均P＜0.05).结论 Vv感染DC可通过TLR2、4表达上调,TNF-α增加导致DNA降解,期间以细胞凋亡与坏死同时并存,但以坏死方式降解为主。
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