【摘 要】
：
目的 克隆、表达、鉴定结核分枝杆菌(MTB) Rv0091基因编码蛋白,分析酶活性,初步鉴定其功能.方法 构建Rv0091基因原核表达质粒,在大肠杆菌BL21trxB进行表达,经IPTG诱导,Ni2+-NTA柱纯化后获得可溶性蛋白,通过SDS-PAGE分析目的蛋白纯度、Western blot进行免疫学活性鉴定、质谱分析重组蛋白相对分子质量、酶耦联法检测酶活性,分析酶学性质.结果 成功构建Rv00
【机 构】
：
030001太原,山西医科大学临床检验诊断学,同济大学附属上海市肺科医院上海市结核病(肺)重点实验室,同济大学附属上海市肺科医院上海市结核病(肺)重点实验室,同济大学附属上海市肺科医院上海市结核病(肺
论文部分内容阅读
目的 克隆、表达、鉴定结核分枝杆菌(MTB) Rv0091基因编码蛋白,分析酶活性,初步鉴定其功能.方法 构建Rv0091基因原核表达质粒,在大肠杆菌BL21trxB进行表达,经IPTG诱导,Ni2+-NTA柱纯化后获得可溶性蛋白,通过SDS-PAGE分析目的蛋白纯度、Western blot进行免疫学活性鉴定、质谱分析重组蛋白相对分子质量、酶耦联法检测酶活性,分析酶学性质.结果 成功构建Rv0091基因原核表达质粒,建立了可溶性蛋白最佳表达体系,获得纯度在95％以上的可溶性蛋白,Western blot结果证实重组蛋白为结核分枝杆菌蛋白,质谱鉴定其相对分子质量与理论值基本一致,酶学活性实验证实重组蛋白能够分解底物5′-甲硫腺苷(MTA),酶学性质分析表明最适缓冲液为磷酸盐缓冲液和Hepes,酶的热稳定性较差,37℃为最适反应温度,最适pH为10 ～ 12.结论 初步证明该重组蛋白在体外能够分解MTA,发挥甲硫腺苷核苷酶(MTAN)的作用,可能在MTB的代谢中起关键作用。
其他文献
器官移植中良好的供受者间HLA配型对预防移植肾早期排斥和移植肾的长期存活具有重要意义.肾移植术后发生排斥的重要因素之一是群体反应性抗体(PRA)的参与,特别是肾移植术后产生抗供者特异性抗体(DSA).因此本文对肾移植供受者HLA分型和DSA对移植肾急性排斥反应和近期肾功能进行研究.现报道如下.材料和方法一般资料:选择了2007年10月至2009年12月间在我院接受肾移植的128例患者,男性88例,
尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的皮肤黏膜病变,主要引起皮肤黏膜的良性增生,某些型别HPV所致皮损易反复发作,甚而导致癌变,故去除疣体、防止复发和癌变是尖锐湿疣治疗的目的.干扰素(interferon,IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增长和免疫调节作用的细胞因子.IFN用于治疗尖锐湿疣已近20年,取得了一定的临床疗效,但尚存一定问题,本文就干扰素在尖锐湿疣中的应用作一综述。
急性髓性白血病( acute myelogenous leukemia,AML)是临床常见的一种造血系统恶性肿瘤.关于HLA与AML的相关性研究,由于环境不同、人种不同,各地的报道结果存在一定差异.本文对732例AML患者及2264例正常对照进行了Ⅱ类基因HLA-DRB1的PCR-SSP基因分型研究,探寻与AML相关的HLA基因.病例组为经临床及实验检查确认的732例急性髓性白血病患者(男性460
目的 观察白桦酯酸作用前后对人CIK细胞增殖及对胃癌SGC-7901细胞杀伤活性的影响,探讨其发生的机制.方法 分离健康者外周血单个核细胞( PBMC)在体外经多种细胞因子诱导为CIK细胞,收集培养第10天的CIK细胞,给予不同浓度白桦酯酸诱导48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测人CIK细胞增殖率；流式细胞术(FCM)检测白桦酯酸作用前后CIK细胞穿孔素(PFP)、颗粒酶B(GrB)、CD10
根据中华医学会安排，中华医学会微生物学与免疫学分会于2011年11月19日在天津召开挟届选举会议。中华医学会杨民副秘书长以及中华医学会组织管理部张辉主任等出席了会议。会议在张辉主任主持下，经无记名投票选举产生了由59人组成的第八届委员会。现将人员组成名单公布如下：
目的 鉴定一个中国汉族人群中发现的人类白细胞抗原(human leukocyte antigens,HLA)B位点新等位基因.方法 应用双链直接测序分型技术进行中华骨髓库供者常规HLA分型,发现一例HLA-B位点无全相配结果,采用等位基因分离DNA测序分型方法进行新等位基因序列鉴定.结果 确定一个等位基因为B*15∶05∶01,另一个为HLA-B*54组的一个新基因序列,与同源性最高的HLA-B*
目的 从分子水平检定b型流感嗜血杆菌,研究不同菌株荚膜多糖结合物的免疫原性.方法 提取基因组,通过型特异和荚膜型基因特异引物,利用PCR检定b型流感嗜血杆菌；不同纯化多糖分别与破伤风类毒素(TT)进行耦联结合,结合物原液经稀释免疫小鼠,通过两针免疫,采血进行免疫效力测定.结果 5株b型流感嗜血杆菌通过PCR法均能获得预期大小的型特异(482 bp)和荚膜型(343 bp)基因片段,BLAST分析显
目的 将原核表达纯化的衣原体噬菌体phiCPGl衣壳蛋白Vpl作用于沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct），以期发现该Vpl蛋白对Ct生长的影响。方法原核表达并纯化噬菌体phiCPGl的衣壳蛋白Vpl，将纯化后的蛋白复性后与ct的标准株或临床野生株（终浓度为53μg／m1）室温孵育3h后接种至单层致密McCoy细胞中，培养过程中均加入了Vpl蛋白，48h后碘染色包涵体计数和
目的 分析丙氨酸氨基转移酶(ALT)正常的血清Anti-HBe阳性的慢性乙型肝炎(CHB)患者与Anti-HBs阳性者外周血程序性死亡分子-1(PD-1,CD279)及其配体(CD274和CD273)的变化并探讨其临床意义.方法 分别选择23例、22例和25例ALT正常的血清Anti-HBe阳性的CHB患者、Anti-HBs阳性者和对照者.采用流式细胞术检测其外周血淋巴细胞CD279、CD274和
目的 通过检测肠外致病性大肠埃希菌(ExPEC) 30种毒力因子了解其基因的检出情况及遗传谱系分型情况,并初步探讨两者关系,探究ExPEC的分子流行病学特点.方法 210株分离自血液、尿液及其他部位的菌株参与研究,采用多重PCR方法检测临床分离菌株毒力因子基因的存在情况并进行遗传谱系分型,比较菌株遗传谱系分型各组间毒力因子基因的检出情况是否有差异.结果 ExPEC中毒力基因fimH、fyuA、tr