【摘 要】
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双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)是一种新型的引物设计方法,具有设计简易、特异性强以及退火温度范围宽的特点。以产肠毒性大肠杆菌LT基因为靶基因,设
【机 构】
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黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心,海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心,东北林业大学研究生院,
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双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)是一种新型的引物设计方法,具有设计简易、特异性强以及退火温度范围宽的特点。以产肠毒性大肠杆菌LT基因为靶基因,设计了一对DPO引物,经过对Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTP反应体系因子的优化,建立了产肠毒性大肠杆菌DPO-PCR检测方法,测定了该方法的灵敏度、特异性以及退火温度不敏感性。结果显示,该方法检测灵敏度为1.24×102CFU/ml,在45℃~65℃退火温度范围内,均可实现靶基因的高效扩增。该方法特异性强,测试菌株中4株产肠毒性大肠杆菌均为阳性结果,其余菌株为阴性结果,且无非特异性扩增发生。与常规PCR方法相比,DPO-PCR方法不需要对引物参数特别是退火温度反复优化,同时DPO引物的特殊结构又增强了检测特异性,为致病性微生物的快速准确检测提供了新方法。
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