【摘 要】
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本试验旨在建立产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)感染小鼠肠炎模型,并初步揭示其分子机制.将120只小鼠随机分为4组,每组30只,每组5个重复,每个重复6只.低、中、高剂量试验组分别经口腔灌服1×105、1×106和1×107 CFU/只ETEC,对照组灌服等体积生理盐水,各组注射剂量均为0.2 mL.分别于攻毒后2、48、72、96和120 h观察小鼠临床表现并称量其体重,同时从每个组中随机取6只采集其血液和组织样本.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-
【机 构】
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天津农学院动物科学与动物医学学院,天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室,天津 300384;天津师范大学生命科学学院,天津市动物多样性保护与利用重点实验室,天津 300387
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本试验旨在建立产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)感染小鼠肠炎模型,并初步揭示其分子机制.将120只小鼠随机分为4组,每组30只,每组5个重复,每个重复6只.低、中、高剂量试验组分别经口腔灌服1×105、1×106和1×107 CFU/只ETEC,对照组灌服等体积生理盐水,各组注射剂量均为0.2 mL.分别于攻毒后2、48、72、96和120 h观察小鼠临床表现并称量其体重,同时从每个组中随机取6只采集其血液和组织样本.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)的含量,通过组织切片和苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠空肠、肝脏和脾脏的病理变化,利用实时荧光定量PCR检测Toll-样受体4(TLR4)、核因子kappa B p65亚基(NF-κB p65)、髓样分化因子88(MyD88)、B细胞淋巴瘤因子3(BCl3)mRNA相对表达量.结果 显示:与对照组相比,攻毒小鼠精神沉郁,进食减少,攻毒后72和96 h试验组小鼠体重均显著或极显著降低(P<0.01或P<0.05),肠道、肝脏和脾脏组织切片出现明显的炎症反应;攻毒后48和72 h试验组血清中CRP、TNF-α和IL-8的含量极显著升高(P<0.01);攻毒后48、72和96 h试验组空肠组织中TLR4、NF-κB p65、MyD88 mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01);攻毒后24和120 h试验组空肠组织中BCl3 mRNA相对表达量分别极显著或显著升高(P<0.01或P<0.05),攻毒后72 h呈极显著下降(P<0.01).综上所述,本研究成功建立了ETEC感染小鼠肠炎模型,并且该病原菌可能是通过TLR4/NF-κB信号通路诱导炎症相关因子生成和组织中炎性细胞浸润,从而引起小鼠炎症反应.
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