【摘 要】
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目的鼠抗人OX40L分子功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定. 方法以高表达人OX40L分子的转基因细胞L929/OX40L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划);
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目的鼠抗人OX40L分子功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定. 方法以高表达人OX40L分子的转基因细胞L929/OX40L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,并以L929/OX40L为阳性抗体筛选细胞,L929/mock为阴性抗体筛选细胞,经免疫荧光标记和流式细胞术分析、反复筛选和多次克隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人OX40L分子单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用Western blot、Ig亚型快速定性试纸法、间接免疫荧光法、竞争结合抑制试验和3H-TdR增殖试验等对单抗进行生物学特性的鉴定. 结果成功获得3株持续、稳定分泌鼠抗人OX40L单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为9H10、4C12和1G1.对单抗的生物学功能的研究结果表明,3株单抗均能识别活化B细胞和成熟DC表达的OX40L分子,且能抑制成熟DC对T细胞的促增殖作用,并与阻断型抗人B7-1单抗具有协同作用. 结论获得的3株分泌鼠抗人OX40L功能性单克隆抗体的杂交瘤,所分泌的抗体具有特异性地识别人OX40L分子并能阻断OX40/OX40L共刺激信号及抑制DC对T细胞的激发作用.
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