CRISPR/Cas9系统介导的EZH2基因定点敲入Hut78细胞系的构建

来源 :天津医药 | 被引量 : 0次 | 上传用户：zj3132

【摘要】

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目的利用CRISPR/Cas9系统构建定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系。方法构建EZH2表达载体pMD-18T-EZH2和单向导RNA（sgRNA）表达载体pSpCas9（BB）-2A-Puro-sgRNA，将两个载体共转染Hut78细

【作者】

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鲁卓林熊显佳吴云丹周慧贾军王双林武莉莉刘艺洁

【机构】

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天津市儿童医院药剂科,天津医科大学基础医学院,中国人民解放军第二五四医院内分泌科,天津医科大学药学院,天津医院足踝二病区,天津医科大学总医院心胸外科,天津医科大学肿瘤医院乳房再造科

【出处】

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天津医药

【发表日期】

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2017年5期

【关键词】

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甲基化 EZH2基因 CRISPR/Cas9n系统基因编辑 methylation EZH2 gene CRISPR/Cas9 system gene edi

【基金项目】

：

国家自然科学基金资助项目(81500170,81472052),天津市自然科学基金项目(15JCYBJC25400,16JCQNJC12100,16JCQNJC10300),天津市高等学校科技发展基金计划项目(20130103),教育部留学回国人员科研启动基金资助项目,天津医科大学肿瘤医院科研项目(B1516)

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目的利用CRISPR/Cas9系统构建定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系。方法构建EZH2表达载体pMD-18T-EZH2和单向导RNA（sgRNA）表达载体pSpCas9（BB）-2A-Puro-sgRNA，将两个载体共转染Hut78细胞，通过qPCR检测EZH2mRNA的表达情况，通过WesternBlot检测EZH2和H3K27me3蛋白的表达情况。结果测序结果显示，构建的pMD-18T-EZH2和pSpCas9（BB）-2A-Puro-sgRNA表达载体插入序列完全正确。将构建的两个质粒共转染

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