【摘 要】
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目的:基于大鼠卵巢切除术(OVX)联合糖皮质激素注射致骨质疏松模型探讨桂枝芍药知母汤(GSZT)对骨质疏松症(OP)模型SD雌鼠的治疗作用.方法:OVX手术1周后,除假手术组外,大鼠分为OP模型组、骨化醇组(0.1 mg·kg-1),GSZT低、中、高剂量组(0.8,1.6,3.2 g·kg-1).除假手术组,大鼠肌肉注射地塞米松(1 mg· kg-1,2次/周),连续6周;给药8周后,处死动物收集股骨样本,计算机微断层扫描(Micro CT)扫描股骨远端1/3,检测骨矿物质密度(BMD),骨体积(BV)
【机 构】
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成都中医药大学药学院,基础医学院,成都611137
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目的:基于大鼠卵巢切除术(OVX)联合糖皮质激素注射致骨质疏松模型探讨桂枝芍药知母汤(GSZT)对骨质疏松症(OP)模型SD雌鼠的治疗作用.方法:OVX手术1周后,除假手术组外,大鼠分为OP模型组、骨化醇组(0.1 mg·kg-1),GSZT低、中、高剂量组(0.8,1.6,3.2 g·kg-1).除假手术组,大鼠肌肉注射地塞米松(1 mg· kg-1,2次/周),连续6周;给药8周后,处死动物收集股骨样本,计算机微断层扫描(Micro CT)扫描股骨远端1/3,检测骨矿物质密度(BMD),骨体积(BV),组织体积(TV),结构模式指数(SMI),骨小梁连接密度(Conn.D),骨小梁数目(Tb.N),骨小梁厚度(Tb.Th),和骨小梁分离度(Tb.Sp).采用苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色检查股骨组织病理学改变.采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色分析骨组织中破骨细胞.采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测骨组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9),组织蛋白酶K(CTSK),抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP5b)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测骨组织中核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL),骨保护素(OPG),碱性磷酸酶(ALP),骨碱性磷酸酶(BALP)蛋白表达.结果:与正常组比较,OP模型大鼠骨松质部位骨小梁数量明显减少,间距增宽,厚度变薄,连续性差;与模型组比较,GZST中、高剂量组对股骨骨松质的骨小梁改变均有改善作用.Masson染色表明与正常组比较,OP模型组股骨远端骨骺生长板厚度变薄,新生骨面积变小,骨化醇及GZST高剂量组可抑制新生骨的减少.TRAP染色结果表明,与正常组比较,OP组破骨细胞数目明显增加,与模型组比较,GZST中、高剂量组可减少OP大鼠破骨细胞数量.Micro CT结果表明,与正常组比较,OP大鼠BMD,BV,Tb.N,Tb.Th和Conn.D减小,SMI和Tb.Sp显著升高(P＜0.01);与模型组比较,GZST中、高剂量可改善OP大鼠骨质疏松程度,BV,Tb.N显著升高,SMI,Tb.Sp显著降低(P＜0.01).ELISA结果表明,与正常组比较,OP模型组ALP含量显著减少(P＜0.01),MMP-9,TRAP5b和CTSK含量显著增多(P＜0.01);与模型组比较,GSZD高剂量ALP含量显著升高(P＜0.01),MMP-9,TRAP5b和CTSK显著减少(P＜0.01).Western blot结果表明,与模型组比较,骨化醇组及GSZD高剂量组均抑制RANKL蛋白的表达(P＜0.05),提高OPG表达(P＜0.05).结论:本研究表明GZST对OVX联合激素引起的大鼠骨质疏松具有治疗作用,其机制与调节RANKL,OPG相关,为其进一步的临床应用和现代制剂开发奠定了一定基础.
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