香蕉类胡萝卜素羟化酶基因LUT5克隆与分析

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LUT5(lutein deficient 5)负责编码类胡萝卜素羟化酶CYP97A3,参与类胡萝卜素羟基化。为研究LUT5对香蕉果肉类胡萝卜素的调控,本试验以Pilose香蕉叶片为模板,根据NCBI预测的香蕉LUT5序列设计引物进行克隆,并对蛋白质结构进行分析。结果显示,克隆出的MtLUT5 CDS区全序列长为1971 bp,编码656个氨基酸;MtLUT5蛋白为亲水性不稳定酸性蛋白,主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,定位于叶绿体外膜。对Pilose香蕉各个组织进行qRT-PCR检测,结果显示MtLUT5基因具有很强的组织特异性,且在生殖器官的表达水平高于营养器官。此外,对转pBI121-MtLUT5拟南芥进行GUS组织化学染色分析,结果显示MtLUT5能在拟南芥全株表达。经过完全黑暗处理后,LUT5在AAA基因型中的表达量显著提升,而在BBB基因型的表达量下降。在Pilose变黄的果实中瞬时超表达MtLUT5,MtLUT5表达量和总类胡萝卜素含量显著提高,编码ε-羟化酶CYP97C1的LUT1(lutein deficient 1)表达量变化不显著。综上,初步推断LUT5在AAA基因型香蕉果肉类胡萝卜素途径起正调控作用,能促进类胡萝卜素形成。本研究为阐明MtLUT5功能、分子育种培育高类胡萝卜素香蕉奠定理论基础。
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