【摘 要】
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目的 研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对人肝癌HepG2细胞胆固醇合成的影响并探讨可能的机制.方法 设置对照组和1、5、10μmol/L DEHP干预HepG2细胞组,MTT法测定细胞活性,
【机 构】
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中山大学公共卫生学院营养学系,广东省营养膳食与健康重点实验室,广东广州510080
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目的 研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对人肝癌HepG2细胞胆固醇合成的影响并探讨可能的机制.方法 设置对照组和1、5、10μmol/L DEHP干预HepG2细胞组,MTT法测定细胞活性,总胆固醇试剂盒测定细胞内总胆固醇的含量,Western Blot测定细胞内胆固醇合成关键基因胆固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)和羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)的表达水平,小干扰RNA实验中用siRNA SREBP-2和LipofectamineTM 2000转染试剂筛查最佳转染剂量,沉默SREBP-2后再次测定HMGCR的表达水平和总胆固醇含量.结果 1、5、10μmol/L DEHP干预HepG2细胞后,与对照组相比,细胞的存活率依次是99.0％、101.4％和98.2％,差异均无统计学意义(P>0.05).细胞内总胆固醇含量,SREBP-2和HMGCR的蛋白表达水平均呈剂量依赖性递增,与对照组相比,5、10μmol/L DEHP干预组差异有统计学意义(P<0.05),其中10μmol/L DEHP干预组效果最显著.用siRNA SREBP-2和12μL LipofectamineTM 2000转染试剂可获得最佳转染效率.用siRNA SREBP-2和12μL LipofectamineTM 2000转染试剂混合溶液沉默细胞内的SREBP-2后,10μmol/L DEHP干预细胞,与对照组相比,HMGCR的表达和总胆固醇含量下降(P<0.05).结论 DEHP在一定程度上可能通过SREBP-2/HMGCR信号通路来促进HepG2细胞内胆固醇合成.
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