DNA断裂点标记法检测凋亡优于DNA含量分析法

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本文以地塞米松(25mg/kg)腹腔注射10h后诱导的BALB/c鼠(n=5x)胸腺细胞作为凋亡阳性细胞,比较了碘化丙啶(PI,propidiumiodium)染色DNA含量分析和TUNEL(TdT—mediatedX-dUTPnickendlabeling)标记DNA断裂点分析两种方法在检测凋亡中的差异。流式细胞仪分析结果表明,PI检测凋亡的阳性率29.3±8.1%(x±s)明显低于TUNEL检测的阳性率(40.2±8.7%),P<0.01(配对t检验)。进一步用PI和TUNEL双参数分析显示,在PI检测阳性的颗粒中有4.7±2.2%是TUNEL检测阴性的,即没有DNA断裂点的增加,这些颗粒很可能是细胞碎片,它们导致了PI检测的假阳性。另外TUNEL阳性的细胞中有42.8±10.6%处在S期和G2/M期,因而用PI检测为阴性,造成PI方法的漏检,即假阴性。我们的资料表明,PI检测凋亡与TUNEL相比有很高的漏检率和一定的假阳性,因此PI只适用于凋亡初步分析。要进行准确的定量分析应该用TUNEL法。
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