探讨去盆腔神经支配(PND)对大鼠远端结肠黏膜瞬时受体电位通道V1(TRPV1)的影响。
方法采用实验研究方法。将108只成年雄性大鼠按数字表法随机分成对照组、假手术组及PND组3组:(1)对照组36只,大鼠不做特殊处理,常规饲养;(2)假手术组36只,大鼠开腹后旷置15 min,不施行手术,关闭腹腔;(3)PND组36只,大鼠开腹后剥离出盆腔神经,显微剪剪断,缝合切口,关闭腹腔。采用免疫组织化学染色、Western blot检测各组大鼠术后第1、3、7天远端结肠黏膜中TRPV1蛋白表达,反转录实时定量PCR(RT-qPCR)检测各组大鼠术后第1、3、7天远端结肠黏膜中TRPV1 mRNA水平。正态分布的计量资料以
±s表示。重复测量数据采用重复测量方差分析。同时相点组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用独立样本t检验。
(1)免疫组织化学染色检测TRPV1表达情况:对照组大鼠远端结肠黏膜TRPV1平均光密度值术后第1、3、7天分别为0.180±0.016、0.179±0.015、0.183±0.026,3者比较,差异无统计学意义(F=0.088,P>0.05)。假手术组大鼠远端结肠黏膜TRPV1平均光密度值术后第1、3、7天分别为0.132±0.017、0.160±0.023、0.173±0.020,3者比较,差异有统计学意义(F=8.699,P<0.05)。PND组大鼠远端结肠黏膜TRPV1平均光密度值术后第1、3、7天分别为0.057±0.009、0.122±0.016、0.180±0.016,3者比较,差异有统计学意义(F=113.315,P<0.05)。对照组、假手术组及PND组大鼠远端结肠黏膜TRPV1平均光密度值术后第1、3天比较,差异均有统计学意义(F=108.960,15.218,P<0.05)。术后第1天对照组分别与假手术组、PND组比较,差异均有统计学意义(t=5.025,15.979,P<0.05);假手术组与PND组比较,差异有统计学意义(t=9.590,P<0.05)。术后第3天对照组与假手术组比较,差异无统计学意义(t=1.670,P>0.05);对照组与PND组比较,差异有统计学意义(t=6.543,P<0.05);假手术组与PND组比较,差异有统计学意义(t=3.361,P<0.05)。3组大鼠远端结肠黏膜TRPV1平均光密度值术后第7天比较,差异无统计学意义(F=0.518,P>0.05)。(2)Western blot检测TRPV1表达情况:对照组大鼠远端结肠黏膜TRPV1蛋白相对表达量术后第1、3、7天分别为1.02±0.13、1.00±0.15、1.00±0.10,3者比较,差异无统计学意义(F=0.084,P>0.05)。假手术组大鼠远端结肠黏膜TRPV1蛋白相对表达量术后第1、3、7天分别为0.51±0.13、0.93±0.14、1.01±0.16,3者比较,差异有统计学意义(F=20.930,P<0.05)。PND组大鼠远端结肠黏膜TRPV1蛋白相对表达量术后第1、3、7天分别为0.30±0.10、0.70±0.10、1.07±0.16,3者比较,差异有统计学意义(F=61.441,P<0.05)。对照组、假手术组及PND组大鼠远端结肠黏膜TRPV1蛋白相对表达量术后第1、3天比较,差异均有统计学意义(F=58.014,8.841,P<0.05)。术后第1天对照组分别与假手术组、PND组比较,差异均有统计学意义(t=6.677,11.145,P<0.05);假手术组与PND组比较,差异有统计学意义(t=3.287,P<0.05)。术后第3天对照组与假手术组比较,差异无统计学意义(t=0.798,P>0.05);对照组与PND组比较,差异有统计学意义(t=4.127,P<0.05);假手术组与PND组比较,差异有统计学意义(t=3.398,P<0.05)。3组大鼠远端结肠黏膜TRPV1蛋白相对表达量术后第7天比较,差异无统计学意义(F=0.428,P>0.05)。(3)RT-qPCR检测TRPV1表达情况:对照组大鼠远端结肠黏膜TRPV1 mRNA水平术后第1、3、7天分别为1.00±0.15、1.10±0.21、1.09±0.18,3者比较,差异无统计学意义(F=0.489,P>0.05)。假手术组大鼠远端结肠黏膜TRPV1 mRNA水平术后第1、3、7天分别为0.58 ±0.12、0.99±0.19、1.13±0.23,3者比较,差异有统计学意义(F=13.964,P<0.05)。PND组大鼠远端结肠黏膜TRPV1 mRNA水平术后第1、3、7天分别为0.31±0.10、0.67±0.12、1.09±0.19,3者比较,差异有统计学意义(F=44.642,P<0.05)。对照组、假手术组及PND组大鼠远端结肠黏膜TRPV1 mRNA水平术后第1、3天比较,差异均有统计学意义(F=44.653,9.700,P<0.05)。术后第1天对照组分别与假手术组、PND组比较,差异均有统计学意义(t=5.233,9.264,P<0.05);假手术组与PND组比较,差异有统计学意义(t=4.127,P<0.05)。术后第3天对照组与假手术组比较,差异无统计学意义(t=0.995,P>0.05);对照组与PND组比较,差异有统计学意义(t=4.411,P<0.05);假手术组与PND组比较,差异有统计学意义(t=3.505,P<0.05)。3组大鼠远端结肠黏膜TRPV1 mRNA水平术后第7天比较,差异无统计学意义(F=0.099,P>0.05)。
结论PND后,大鼠远端结肠黏膜TRPV1表达显著下调,但随时间推移逐步回升,这与盆腔神经损伤后结肠传输功能先减慢后逐步恢复的趋势一致。